Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 7 trang
Dung lượng: 180 KB

Giới thiệu nội dung

The N-terminus of m5C-DNA methyltransferase MspI is involved in its topoisomerase activity

Tác giả: Sanjoy K. Bhattacharya and Ashok K. Dubey

Lĩnh vực: Biochemical Engineering and Biotechnology, Indian Institute of Technology-Delhi, New Delhi, India

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của đầu N (N-terminus) của enzyme methyltransferase M.MspI trong hoạt động topoisomerase của nó, bên cạnh khả năng methyl hóa DNA. Các thí nghiệm sử dụng quá trình phân giải bằng protease hạn chế và sửa đổi hóa học đã chỉ ra rằng đầu N của M.MspI là cần thiết cho hoạt động topoisomerase. Việc cắt bỏ hoặc biến đổi đầu N này đã làm mất hoạt tính topoisomerase trong khi vẫn giữ nguyên hoạt tính methyltransferase.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Thủ tục thực nghiệm
  • Tế bào vi khuẩn và plasmid
  • Kiểm nghiệm hoạt tính MTase
  • Phân tích protein
  • Sửa đổi M.MspI bằng 2-hydroxy-5-nitrobenzyl bromide (HNBB)
  • Tối ưu hóa nồng độ trypsin và thời gian phản ứng cho quá trình phân giải
  • Định lượng trình tự peptide
  • Kiểm nghiệm hoạt tính topoisomerase I
  • Đột biến gen
  • Biểu hiện và tinh sạch M.MspI bị cắt cụt (del 34aa)
  • Kết quả
  • Căn chỉnh trình tự M.MspI với topoisomerase I và DNA ligase
  • Phân giải M.MspI
  • Hoạt tính topoisomerase của M.MspI bị sửa đổi bằng HNBB
  • Định lượng hoạt tính MTase và topoisomerase của các mảnh peptide phân giải
  • Ảnh hưởng của đột biến lên hoạt tính enzyme
  • Đặc điểm của M.MspI bị cắt cụt (del34aa)
  • Thảo luận
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo