Báo cáo khoa học: Yeast glycogenin (Glg2p) produced in Escherichia coli is simultaneously glucosylated at two vicinal tyrosine residues but results in a reduced bacterial glycogen accumulation

Yeast Glycogenin (Glg2p) Produced in Escherichia coli Is Simultaneously Glucosylated at Two Vicinal Tyrosine Residues but Results in a Reduced Bacterial Glycogen Accumulation

Tác giả: Tanja Albrecht, Sophie Haebel, Anke Koch, Ulrike Krause, Nora Eckermann, và Martin Steup

Lĩnh vực: Sinh hóa, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá quá trình sản xuất và chức năng của yeast glycogenin (Glg2p) trong vi khuẩn Escherichia coli (E. coli). Glg2p được biểu hiện và tinh sạch, sau đó được phân tích để xác định các vị trí tự-glucosylation. Kết quả cho thấy Glg2p có khả năng glucosylation đồng thời tại hai gốc tyrosine liền kề là Tyr230 và Tyr232. Mặc dù Glg2p được biểu hiện một cách chức năng trong E. coli, việc sản xuất protein này không thúc đẩy sự tích lũy glycogen của vi khuẩn mà còn làm giảm khoảng 30% lượng glycogen tích lũy so với chủng đối chứng. Phân tích các mẫu maltodextrin cho thấy sự thay đổi trong các hợp chất oligosaccharide khi có mặt Glg2p. Điều này gợi ý rằng glycogenin từ nấm men có thể không tương thích với quá trình tổng hợp glycogen của vi khuẩn.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Cloning of Glg2p
• Production of Glg2p in E. coli and purification
• Glycogen-related enzyme activities
• Autoglycosylation assay
• Protein in-gel digestion and extraction of peptides
• Protein cleavage by cyanogen bromide
• α-Amylase treatment
• Amyloglucosidase treatment
• Reversed phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC)
• Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometry
• Nanoelectrospray quadrupole time of flight (NanoESI Q-TOF) mass spectrometry
• Glycogen extraction and quantification (procedure A)
• Glycogen extraction and size distribution (procedure B)
• Maltooligosaccharide patterns
• Results
• Glucosylation of recombinant Glg2p
• Identification of glucosylation sites
• Expression of the eukaryotic glycogenin and bacterial glycogen accumulation
• Bacterial maltodextrin patterns
• Discussion
• Acknowledgements
• References