Báo cáo khoa học: Calcium modulates endopeptidase 24.15 (EC 3.4.24.15) membrane association, secondary structure and substrate specificity

Calcium Modulates Endopeptidase 24.15 Membrane Association, Secondary Structure and Substrate Specificity

Tên đề tài: Calcium modulates endopeptidase 24.15 (EC 3.4.24.15) membrane association, secondary structure and substrate specificity

Tác giả: Vitor Oliveira, Paula A. G. Garrido, Claudia C. Rodrigues, Alison Colquhoun, Leandro M. Castro, Paulo C. Almeida, Claudio S. Shida, Maria A. Juliano, Luiz Juliano, Antonio C. M. Camargo, Stephen Hyslop, James L. Roberts, Valerie Grum-Tokars, Marc J. Glucksman and Emer S. Ferro

Lĩnh vực: Sinh hóa, Tế bào học, Dược lý

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của canxi trong việc điều chỉnh sự liên kết với màng, cấu trúc thứ cấp và đặc tính xúc tác của enzyme endopeptidase 24.15 (EP24.15). Các thí nghiệm chỉ ra rằng canxi điều hòa sự liên kết của EP24.15 với màng tế bào, ảnh hưởng đến cấu trúc thứ cấp của nó và thay đổi đặc tính nhận diện cơ chất. Cụ thể, sự thiếu hụt canxi dường như thúc đẩy enzyme tách khỏi màng tế bào vào môi trường ngoại bào. Một số dư lượng axit amin, đặc biệt là D93, được xác định là đóng vai trò quan trọng trong sự liên kết phụ thuộc canxi này với màng tế bào. Nghiên cứu cũng cho thấy canxi có thể làm thay đổi vị trí cắt của EP24.15 trên các cơ chất huỳnh quang cụ thể, cho thấy canxi có thể là một yếu tố điều hòa quan trọng đối với chức năng của EP24.15 trong tế bào.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Discussion
• Experimental procedures
• Cell culture
• Determination of EP24.15 activity of intact glioma C6 cells by HPLC
• Determination of soluble G6PD enzyme activity
• Trypan blue exclusion assay
• Western blots
• Immunocytochemistry for light and electron microscopy
• Site-direct mutagenesis and protein expression
• CD
• Kinetic assays
• Determination of cleaved bonds
• Protein assay
• Molecular modeling
• Acknowledgements
• References