Báo cáo khoa học: Transcription of mammalian cytochrome c oxidase subunit IV-2 is controlled by a novel conserved oxygen responsive element

Transcription of mammalian cytochrome c oxidase subunit IV-2 is controlled by a novel conserved oxygen responsive element

Tác giả: Maik Hüttemann, Icksoo Lee, Jenney Liu và Lawrence I. Grossman

Lĩnh vực: Y Sinh học Phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc khám phá cơ chế điều hòa biểu hiện của gen mã hóa cho tiểu đơn vị IV-2 của cytochrome c oxidase (CcO4-2), một isoform đặc hiệu cho phổi và khí quản ở động vật có vú, được biểu hiện sau khi sinh. Các nhà nghiên cứu đã xác định một yếu tố phản ứng oxy mới (ORE) nằm trong vùng promoter gần của gen CcO4-2. Yếu tố này, được bảo tồn ở nhiều loài, đóng vai trò quan trọng trong việc điều hòa biểu hiện gen CcO4-2 dưới điều kiện thiếu oxy. Nghiên cứu cũng so sánh hoạt tính củaCcO từ phổi và gan, cho thấy CcO từ phổi có hoạt tính cao hơn đáng kể, và đề xuất rằng CcO4-2 có thể đóng vai trò bảo vệ các mô giàu oxy khỏi tổn thương do oxy hóa bằng cách tăng tốc bước cuối cùng của chuỗi chuyền điện tử.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• CcO4-2 is a respiratory system isoform
• Phylogenetic footprinting utilizing ‘one-way PCR’ reveals a 24-bp conserved region in the CcO4-2 promoter
• Human CcO4-2 gene activity is driven by the 118-bp proximal promoter region
• A novel ORE mediates hypoxia-induced human CcO4-2 gene activity
• CcO4-2 hypoxic response is threefold induced at 4% oxygen
• Electrophoretic mobility shift assay (EMSA) with ORE probe
• Lung CcO is a high-activity isozyme
• Discussion
• Experimental procedures
• Cell lines and reagents
• RNA isolation and quantitative PCR
• Cloning of the promoter regions with a novel method: ‘one-way PCR’ (Fig. 1A)
• Reporter gene constructs
• Site-directed mutagenesis
• Transfection and luciferase assay
• Preparation of nuclear extract and EMSA
• Quantification of EMSA bands
• Isolation of CcO and enzymatic activity measurements
• Acknowledgements
• References