Báo cáo khoa học: The yeast ubiquitin ligase Rsp5 downregulates the alpha subunit of nascent polypeptide-associated complex Egd2 under stress conditions

The Yeast Ubiquitin Ligase Rsp5 Downregulates the Alpha Subunit of Nascent Polypeptide-Associated Complex Egd2 Under Stress Conditions

Tác giả: Hiroyuki Hiraishi, Takashi Shimada, Iwao Ohtsu, Taka-Aki Sato, Hiroshi Takagi

Lĩnh vực: Sinh học Phân tử, Di truyền học Vi sinh vật

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của enzyme ubiquitin ligase Rsp5 trong việc điều hòa protein Egd2, một thành phần của phức hợp nascent polypeptide-associated complex (NAC), dưới các điều kiện căng thẳng (stress). Các nhà nghiên cứu đã sử dụng phân tích proteome so sánh giữa chủng nấm men hoang dã (wild-type) và chủng đột biến rsp5 dưới điều kiện stress. Kết quả cho thấy Egd2 bị ubiquitination bởi Rsp5 và sau đó được phân giải chủ yếu thông qua con đường proteasome. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng quá trình ubiquitination Egd2 bởi Rsp5 diễn ra độc lập với các yếu tố Egd1 và Not4 trong điều kiện stress. Phát hiện này nhấn mạnh vai trò của Rsp5 trong việc phân giải chọn lọc các protein không ổn định phát sinh dưới điều kiện stress, góp phần vào sự sống sót của tế bào.

Mục lục chi tiết:

• Abstract
• Keywords
• Correspondence
• Introduction
• Results
• Comparative proteome analysis of the wild-type and rsp5 mutant cells under stress conditions
• Identification of substrates of Rsp5 under stress conditions
• Ubiquitination of Egd2 by Rsp5 under stress conditions
• Ubiquitination of Egd2 is independent of Egd1 and Not4
• Degradation pathway of Egd2 ubiquitinated by Rsp5
• Discussion
• Materials
• Strains and plasmids
• Culture media
• Disruption of the NOT4 and EGD1 genes
• Sample preparation, 2D-PAGE, and gel image analysis
• Protein identification by MS
• Cycloheximide (CX) chase analysis
• SDS-PAGE and western blotting
• Immunoprecipitation
• Protein purification
• In vitro ubiquitination assay
• Acknowledgements
• References
• Supporting information