Substrate Specificity and Catalytic Mechanism of a Xyloglucan Xyloglucosyl Transferase HvXET6 from Barley (Hordeum vulgare L.)

Substrate Specificity and Catalytic Mechanism of a Xyloglucan Xyloglucosyl Transferase HvXET6 from Barley (Hordeum vulgare L.)

Tác giả: Maria Hrmova, Vladimir Farkas, Andrew J. Harvey, Jelle Lahnstein, Bente Wischmann, Nomchit Kaewthai, Inés Ezcurra, Tuula T. Teeri, Geoffrey B. Fincher

Lĩnh vực: Agriculture, Food and Wine, Australian Centre for Plant Functional Genomics; Chemistry, Centre of Excellence GLYCOBIOS; Biotechnology

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập, tinh chế, xác định cấu trúc và mô tả cơ chế hoạt động của enzyme xyloglucan xyloglucosyl transferase (HvXET6) từ lúa mạch. Enzyme, thuộc nhóm glycoside hydrolase họ 16, đã được tinh chế từ chiết xuất mầm lúa mạch non. Quá trình nghiên cứu bao gồm việc phân tích trình tự amino acid, biểu hiện protein tái tổ hợp trong Pichia pastoris, và đánh giá đặc tính hoạt động. Các thử nghiệm về đặc tính cơ chất và động học đã được thực hiện để so sánh HvXET6 với các isoenzyme XET đã biết. Ngoài ra, mô hình hóa phân tử đã được sử dụng để làm rõ cấu trúc không gian của enzyme và mối liên hệ với hoạt tính xúc tác. Kết quả nghiên cứu cung cấp cái nhìn sâu sắc về cơ chế hoạt động và đặc tính của HvXET6, góp phần vào hiểu biết về vai trò của enzyme này trong thành tế bào thực vật.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Keywords
• Abbreviations
• Substrate specificity and catalytic mechanism of HvXET6
• Results
• Separation of HvXET isoenzymes by preparative fast flow electrophoresis (FFE) and IEF
• Purification and identification of HvXET6
• Expression of HvXET6 in P. pastoris
• Substrate specificity of HvXETs
• Kinetic parameters
• Action patterns of HvXETs
• Relative reaction rates of HvXETs with cello-oligosaccharides labelled with sulforhodamine (CEO-SRs)
• Molecular modelling of HvXET5 and HvXET6