Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 232 KB

Giới thiệu nội dung

S-Stereoselective piperazine-2-tert-butylcarboxamide hydrolase from Pseudomonas azotoformans IAM 1603 is a novel L-amino acid amidase

Tác giả: Hidenobu Komeda, Hiroyuki Harada, Shingo Washika, Takeshi Sakamoto, Makoto Ueda, and Yasuhisa Asano

Lĩnh vực: Biotechnology Research Center, Toyama Prefectural University; Mitsubishi Chemical Group Science and Technology Research Center, Inc.

Nội dung tài liệu: Bài báo này mô tả quá trình tinh sạch và đặc tính hóa một enzyme amidase từ vi khuẩn Pseudomonas azotoformans IAM 1603. Enzyme này, được đặt tên là LaaA, thể hiện khả năng thủy phân S-stereoselective đối với (R,S)-piperazine-2-tert-butylcarboxamide, tạo ra (S)-piperazine-2-carboxylic acid. Nghiên cứu cũng đã xác định trình tự N-terminal và các đoạn nội bộ của enzyme, đồng thời giải trình tự gen laaA mã hóa cho enzyme này. Gen laaA sau đó đã được biểu hiện trong Escherichia coli, và enzyme tái tổ hợp đã được tinh sạch và đặc tính hóa, cho thấy hoạt tính thủy phân đối với các L-amino acid amide khác nhau, nhưng không có hoạt tính đối với các cơ chất peptide của proline iminopeptidases, mặc dù có sự tương đồng về trình tự. Enzyme này được đặt tên là L-amino acid amidase dựa trên đặc tính của nó.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và phương pháp
  • Nuôi cấy vi khuẩn, plasmid và điều kiện nuôi cấy
  • Tinh sạch amidase từ P. azotoformans IAM 1603
  • Kiểm tra enzyme
  • Đo đạc phân tích
  • Kết quả
  • Tinh sạch amidase từ P. azotoformans IAM 1603
  • Sự thủy phân S-stereoselective của (R,S)-piperazine-2-tert-butylcarboxamide bởi các tế bào của P. azotoformans IAM 1603 và phân tích lập thể của axit piperazine-2-carboxylic được tạo ra bởi amidase đã tinh sạch.
  • Phân tích lập thể của axit piperazine-2-carboxylic được tạo ra bởi phản ứng của amidase đã tinh sạch.
  • Nhân dòng gen amidase
  • Phân tích trình tự DNA
  • Biểu hiện gen laaA trong E. coli
  • Tinh sạch amidase từ chủng biến nạp E. coli
  • Hình 4. Thủy phân S-stereoselective của (R,S)-piperazine-2-tert-butylcarboxamide bởi các tế bào của E. coli JM109/pSTB20.
  • Bảng 2. Tinh sạch LaaA từ E. coli JM109 mang pSTB20.
  • Hình 5. SDS/PAGE của LaaA.
  • Độ ổn định
  • Độ ổn định của enzyme
  • Đặc tính pH và nhiệt độ
  • Ảnh hưởng của các chất ức chế và ion kim loại
  • Đặc tính cơ chất
  • Bảng 3. Đặc tính cơ chất của LaaA đã tinh sạch.
  • Thảo luận
  • Bảng 4. So sánh các đặc tính của LaaA từ P. azotoformans IAM 1603 và các amidase L-amino acid vi khuẩn.
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo