Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 221 KB

Giới thiệu nội dung

Re-oxygenation of hypoxic simian virus 40 (SV40)-infected CV1 cells causes distinct changes of SV40 minichromosome-associated replication proteins

Tác giả: Hans-Jörg Riedinger, Maria van Betteraey-Nikoleit and Hans Probst

Lĩnh vực: Vi Sinh học Phân tử, Sinh học Tế bào

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khảo sát sự ức chế quá trình khởi đầu sao chép của virus SV40 trong điều kiện thiếu oxy (hypoxia) và sự phục hồi khi có oxy trở lại (re-oxygenation). Các nhà nghiên cứu đã phân tích sự gắn kết của các protein sao chép vào minichromosome của virus trước và sau khi tái oxy hóa. Kết quả cho thấy một số protein cần thiết cho quá trình sao chép đã gắn vào minichromosome ngay cả trong điều kiện thiếu oxy, nhưng các phức hợp protein hoàn chỉnh cho quá trình tách sợi, tổng hợp mồi và kéo dài chuỗi chỉ được hình thành khi có oxy. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng quá trình tách sợi của vùng gốc SV40 xảy ra ngay sau khi tái oxy hóa, nhưng không xảy ra dưới điều kiện thiếu oxy. Các phát hiện này cung cấp cái nhìn sâu sắc về cơ chế điều hòa quá trình sao chép DNA phụ thuộc vào oxy.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và phương pháp
  • Chuẩn bị minichromosome SV40
  • Phân tích ly tâm kiềm của DNA virus trong minichromosome và nhân
  • Điện di protein gắn trên minichromosome, Western blotting
  • Phân cắt minichromosome được miễn dịch bằng micrococcus nuclease và tương quan các sản phẩm phân cắt với bộ gen SV40
  • Phân cắt nuclease P1 của minichromosome SV40
  • Phân lập DNA SV40 từ nuôi cấy tế bào, điện di gel chloroquine, Southern blotting, lai
  • Cạnh tranh gắn kết RPA-34 vào minichromosome bằng DNA sợi đơn
  • Kết quả
  • Minichromosome được ly giải đại diện cho trạng thái sao chép virus trong tế bào bị nhiễm SV40
  • Mô hình khác biệt của protein gắn trên minichromosome xảy ra trước và sau khi tái oxy hóa tế bào thiếu oxy
  • T kháng nguyên gắn vào vùng gốc sao chép trong minichromosome SV40
  • Độ nhạy của minichromosome SV40 với nuclease P1 đặc hiệu DNA sợi đơn tăng lên sau khi tái oxy hóa
  • RPA-34 bị phân ly khỏi minichromosome thiếu oxy do bổ sung DNA đối kháng sợi đơn
  • Sự phosphoryl hóa của tiểu đơn vị 34 kDa của RPA không thiết yếu cho việc tách sợi của minichromosome virus
  • Thảo luận