Báo cáo khoa học: Purification and gene cloning ofFundulus heteroclitus hatching enzyme A hatching enzyme system composed of high choriolytic enzyme and low choriolytic enzyme is conserved between two different teleosts,Fundulus heteroclitusand medaka Oryzias latipes

Purification and gene cloning of Fundulus heteroclitus hatching enzyme

Tác giả: Mari Kawaguchi, Shigeki Yasumasu, Akio Shimizu, Junya Hiroi, Norio Yoshizaki, Koji Nagata, Masaru Tanokura, and Ichiro Iuchi

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập và làm rõ gen của enzyme nở (hatching enzyme) ở cá Fundulus heteroclitus. Các nhà nghiên cứu đã xác định và mô tả hai dạng enzyme tương đồng với enzyme nở ở cá medaka (Oryzias latipes), bao gồm enzyme có khả năng phân hủy màng trứng cao (HCE) và enzyme có khả năng phân hủy màng trứng thấp (LCE). Kết quả phân tích trình tự amino acid và cấu trúc gen cho thấy sự tương đồng cao giữa các enzyme này ở hai loài cá. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng cả hai loại enzyme, HCE và LCE, cùng hoạt động để phân hủy màng trứng một cách hiệu quả, tạo nên một hệ thống enzyme nở được bảo tồn giữa hai loài cá xương khác nhau.

Mục lục chi tiết:

• Purification and gene cloning of Fundulus heteroclitus hatching enzyme
• A hatching enzyme system composed of high choriolytic enzyme and low choriolytic enzyme is conserved between two different teleosts, Fundulus heteroclitus and medaka Oryzias latipes
• Authors and Affiliations
• Keywords
• Correspondence
• Note
• Abstract
• Abbreviations
• Results
• Fundulus homologues of HCE and LCE
• Fig. 1. Multiple sequence alignment of amino acid sequences of Fundulus hatching enzymes (FHCE and FLCE), medaka HCE and LCE (MHCE and MLCE), masu salmon HCE (MsHCE1), zebrafish HCE (ZHCE1) and Japanese eel HCE (EHCE12).
• Fig. 2. Phylogenetic tree of amino acid sequences of the mature enzyme portions of teleost hatching enzymes constructed by the neighbor-joining method.
• Fig. 3. Exon-intron structures of the FHCE, FLCE, MHCE and MLCE genes.
• Expression of FHCE and FLCE genes
• Fig. 4. Northern blot analysis of the expression of FHCE and FLCE gene.
• Fig. 5. FHCE and FLCE gene expression in Fundulus embryos detected by whole-mount in situ hybridization with FHCE (A-C) and FLCE (D-F) RNA probes.
• Isolation and enzymological characterization of FHCE and FLCE
• Fig. 6. Purification of Fundulus hatching enzymes.
• Fig. 7. SDS/PAGE.
• Fig. 8. Part of the TOF-MS spectrogram of fraction I-a (A), II-a (B) and II-b (C).
• Fig. 9. Substrate specificity of FHCE1, FHCE2 or MHCE examined with several MCA-peptides.
• Fig. 10. pH dependency of proteolytic activity of FHCE1, FHCE2 or MHCE.
• Fig. 11. Time course of solubilization of chorion by FHCE1, FHCE2 and/or FLCE fraction.
• Fig. 12. Electron microscopic observation of solubilization of chorion by FHCE2 and/or FLCE fraction.
• Discussion
• Experimental procedures
• Cloning of Fundulus homologues of HCE and LCE cDNAs
• Phylogenetic analysis
• Gene amplification
• Northern blot analysis
• Whole-mount in situ hybridization
• Purification of hatching enzyme
• SDS/PAGE
• Determination of amino acid sequences of the N-terminal regions of FHCE1 and FHCE2
• TOF/MS
• Estimation of proteolytic activity
• Estimation of MCA-peptide-cleaving activity
• Determination of protein content
• Estimation of choriolytic activity
• Electron microscopy
• Acknowledgements
• References