Báo cáo Y học: Purification, crystallization, NMR spectroscopy and biochemical analyses of a-phycoerythrocyanin peptides

Purification, Crystallization, NMR Spectroscopy and Biochemical Analyses of α-Phycoerythrocyanin Peptides

Tác giả: Georg Wiegand, Axel Parbel, Markus H. J. Seifert, Tad A. Holak, and Wolfgang Reuter

Lĩnh vực: Biochemistry, Spectroscopy, Structural Biology

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này trình bày một phương pháp hiệu quả để tách và tinh sạch các phức hợp phycoerythrocyanin (PEC) và tiểu đơn vị α-phycoerythrocyanin (α-PEC) quang hoạt từ vi khuẩn lam Mastigocladus laminosus. Các phân tích bao gồm quang phổ hấp thụ, huỳnh quang và CD, kết tinh, đo phổ NMR, khối phổ và xác định trình tự axit amin N-terminal. Nghiên cứu tập trung vào sự khác biệt về cấu trúc và quang hóa giữa các cấu hình E và Z của tiểu đơn vị α-PEC, cũng như các peptide quang hoạt có nguồn gốc từ sự phân hủy không đặc hiệu của protein. Các kết quả cho thấy sự phù hợp của các phương pháp tinh sạch và cung cấp thông tin ban đầu về mối quan hệ giữa cấu trúc protein và các sự kiện quang hóa.

Mục lục chi tiết:

• Purification, crystallization, NMR spectroscopy and biochemical analyses of α-phycoerythrocyanin peptides
• Materials and Methods
• Strain, culturing conditions and isolation of phycobilisomes
• Purification of PEC complexes
• Purification of the α-PEC subunit
• Optical spectroscopy
• Crystallization of α-PEC
• Mass spectrometry and N-terminal amino acid sequencing
• Structural comparison of the intact α-PEC and the degraded α-PEC peptide 2
• Light-dependent 1D NMR spectroscopy of α-PEC peptide 2
• Results
• Spectral behavior of α-PEC in 0.3% (v/v) formic acid
• Crystallization of α-PEC
• Discussion
• Methodological aspects
• Molecular features of α-PEC peptides
• The photochemistry of α-PEC peptides
• Acknowledgements
• References