Báo cáo khoa học: Mycobacterium tuberculosis possesses a functional enzyme for the synthesis of vitamin C, L-gulono-1,4-lactone dehydrogenase

Mycobacterium tuberculosis possesses a functional enzyme for the synthesis of vitamin C, L-gulono-1,4-lactone dehydrogenase

Tác giả: Beata A. Wolucka and David Communi

Lĩnh vực: Khoa học Y sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này xác định một enzyme L-gulono-1,4-lactone dehydrogenase mới (Rv1771) từ Mycobacterium tuberculosis, một tác nhân gây bệnh lao. Enzyme này có khả năng xúc tác cho bước cuối cùng trong quá trình tổng hợp vitamin C (axit L-ascorbic). Mặc dù enzyme này có thể được biểu hiện trong E. coli, nhưng số lượng thu được rất thấp và có thể bị phân hủy. Enzyme được xác định là có tính đặc hiệu cao đối với L-gulono-1,4-lactone và không có hoạt tính với L-galactono-1,4-lactone. Hoạt động của enzyme bị ảnh hưởng bởi pH và nhiệt độ, và nó hoạt động hiệu quả nhất ở pH 7,5-8 và nhiệt độ 39°C. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng enzyme này có thể đóng vai trò trong độc lực, bệnh sinh và/hoặc sự sống sót của M. tuberculosis trong vật chủ.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Keywords
• Abbreviations
• Results
• Heterologous expression and purification of the recombinant L-gulono-1,4-lactone dehydrogenase (Rv1771) of M. tuberculosis
• Characterization of the recombinant L-gulono-1,4-lactone dehydrogenase of M. tuberculosis
• Presence of L-gulono-1,4-lactone dehydrogenase activity in M. bovis BCG strain Copenhagen
• Discussion
• Experimental procedures
• Chemicals
• Plasmid construction
• Heterologous expression of the recombinant L-gulono-1,4-lactone dehydrogenase
• GST affinity chromatography of the recombinant L-gulono-1,4-lactone dehydrogenase of M. tuberculosis
• Enterokinase cleavage of the GST-tagged L-gulono-1,4-lactone dehydrogenase
• Concentration of protein fractions on Strataclean beads
• Preparation of crude enzyme extracts from M. bovis BCG
• Assay of L-gulono-1,4-lactone dehydrogenase
• PAGE
• Immunoblotting
• MS
• Protein determination
• Ascorbic acid determination
• Acknowledgements
• References