Báo cáo khoa học: Multiple-probe analysis of folding and unfolding pathways of human serum albumin

Multiple-probe analysis of folding and unfolding pathways of human serum albumin

Tác giả: Manas Kumar Santra, Abhijit Banerjee, Shyam Sundar Krishnakumar, Obaidur Rahaman and Dulal Panda

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này sử dụng nhiều kỹ thuật phân tích để khảo sát quá trình gấp nếp và mở nếp của protein Albumin huyết thanh người (HSA). Kết quả cho thấy quá trình mở nếp của HSA dưới tác động của guanidine hydrochloride (GdnHCl) có thể tuân theo quy trình hai trạng thái, tuy nhiên, khi sử dụng huỳnh quang Nile red, quá trình này lại biểu hiện dưới dạng ba trạng thái với sự xuất hiện của một trạng thái trung gian. Trạng thái trung gian này có cấu trúc bậc hai gần giống với trạng thái tự nhiên nhưng cấu trúc bậc ba chỉ được hình thành một phần. Quá trình gấp nếp của HSA dường như tuân theo mô hình khung (framework model).

Mục lục chi tiết:

• Multiple-probe analysis of folding and unfolding pathways of human serum albumin
• Evidence for a framework mechanism of folding
• Experimental procedures
• Materials
• Binding of Nile red to HSA
• Unfolding of HSA probed by Nile red fluorescence
• Steady-state unfolding of HSA probed by intrinsic tryptophan fluorescence
• Unfolding of HSA in the presence of bilirubin
• Unfolding of HSA was probed by monitoring the change in the secondary structure
• Kinetics of HSA refolding was probed by tryptophan fluorescence, Nile red fluorescence and far-UV CD spectroscopy
• Refolding studies by monitoring Nile red fluorescence
• Refolding studies by monitoring tryptophan fluorescence
• Ligand binding properties of refolded HSA
• Light scattering assay
• Calculation of Dm values from equilibrium unfolding
• Calculation of the rate constants from the kinetics of refolding
• Results
• Unfolding of HSA was monitored by the Nile red fluorescence
• Steady-state unfolding of HSA was probed by tryptophan fluorescence and bilirubin binding
• Secondary structural changes during equilibrium unfolding and refolding of HSA monitored by far-UV CD
• Kinetics of HSA refolding was probed by tryptophan fluorescence, Nile red fluorescence and far-UV CD spectroscopy
• Refolding of HSA in the presence of different concentrations of GdnHCl probed by Nile red fluorescence
• Ligand binding properties of the refolded HSA
• Discussion
• Acknowledgements
• References