Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 231 KB

Giới thiệu nội dung

Metal-Binding Stoichiometry and Selectivity of the Copper Chaperone CopZ from Enterococcus hirae

Tên đề tài: Metal-binding stoichiometry and selectivity of the copper chaperone CopZ from Enterococcus hirae

Tác giả: Agathe Urvoas, Mireille Moutiez, Clément Estienne, Joël Couprie, Elisabeth Mintz, and Loïc Le Clainche

Lĩnh vực: Hóa sinh, Khoa học phân tử, Sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khảo sát sự tương tác của các ion kim loại khác nhau với protein đồng chaperone từ Enterococcus hirae (EhCopZ). Kết quả cho thấy tỉ lệ mol của phức protein-kim loại thay đổi tùy thuộc vào điều kiện thí nghiệm. Trong điều kiện nồng độ protein cao trong dung dịch đệm không phối trí, một phức dimer (EhCopZ)2-kim loại được hình thành. Sự hiện diện của một phân tử L có khả năng phối trí trong dung dịch dẫn đến sự hình thành phức tam phân monomeric, EhCopZ-Cu-L, trong đó L có thể là dung dịch đệm hoặc một phân tử phối trí (glutathione, tris(2-carboxyethyl)phosphine). Điều này đã được chứng minh bằng khối phổ điện ly phun tia ESI-MS trong sự hiện diện của glutathione. Sự hiện diện của một tyrosine gần vị trí gắn kim loại cho phép theo dõi sự gắn kết của cadmium với EhCopZ bằng quang phổ huỳnh quang và xác định hằng số phân ly tương ứng (Kd = 30 nM). Các thí nghiệm cạnh tranh đã được thực hiện với thủy ngân, đồng và coban, và các hằng số phân ly tương ứng đã được tính toán. Một sự ưu tiên cao đối với đồng đã được tìm thấy, với giới hạn trên cho hằng số phân ly là 10-12 M. Những kết quả này xác nhận khả năng của EhCopZ gắn đồng ở nồng độ rất thấp trong tế bào sống và có thể cung cấp những manh mối mới trong việc xác định cơ chế hấp thu và vận chuyển đồng của chaperone EhCopZ.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và phương pháp
    • Thiết kế mồi cho gen tổng hợp Ehcopz và vector biểu hiện PQE-cop
    • Biểu hiện và tinh sạch EhCopZ tái tổ hợp
    • Định lượng protein và kim loại cho các thí nghiệm chuẩn độ
    • Chuẩn độ kim loại bằng huỳnh quang
    • Đo quang phổ CD
    • Đo quang phổ hấp thụ UV-vis
    • Chuẩn bị mẫu cho phân tích khối phổ điện ly phun tia (ESI)-MS
    • Đo phổ khối ESI-MS
    • Đo tán xạ ánh sáng
  • Kết quả
    • Phân tích cấu trúc 3D của EhCopZ
    • Tương tác giữa đồng và EhCopZ
    • Nghiên cứu sự gắn kết của Cd(II) với EhCopZ bằng quang phổ huỳnh quang, tán xạ ánh sáng động và quang phổ ESI-MS
    • Tương tác của EhCopZ với Co, Hg, Cu và xác định hằng số phân ly biểu kiến
  • Thảo luận
  • Kết luận
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo
  • Tài liệu bổ sung