Báo cáo khoa học: Mapping contacts between regulatory domains of skeletal muscle TnC and TnI by analyses of single-chain chimeras

Mapping Contacts Between Regulatory Domains of Skeletal Muscle TnC and Tnl

Tên đề tài: Mapping Contacts Between Regulatory Domains of Skeletal Muscle TnC and Tnl

Tác giả: Ana O. Tiroli, Ljubica Tasic, Cristiano L. P. Oliveira, Carlos Bloch Jr, Iris Torriani, Chuck S. Farah, Carlos H. I. Ramos

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Kỹ thuật protein

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc làm sáng tỏ các tương tác cụ thể giữa các miền điều hòa của phức hợp troponin C (TnC) và troponin I (TnI) trong cơ xương. Các nhà nghiên cứu đã tạo ra hai protein lai sợi đơn, kết hợp miền N của TnC với các phần khác nhau của miền C của TnI. Các protein lai này cho thấy khả năng liên kết và điều chỉnh hoạt động ATPase của actomyosin theo cơ chế phụ thuộc canxi, tương tự như phức hợp troponin tự nhiên. Kết quả từ phân tích cấu trúc bằng tán xạ tia X góc nhỏ (SAXS), phổ CD và quang phổ huỳnh quang cho thấy các protein lai này có cấu trúc gọn gàng và chủ yếu là dạng xoắn alpha. Phân tích cắt protein bằng trypsin kết hợp với khối phổ (MS) đã giúp xác định các vùng tương tác quan trọng giữa TnC và TnI, đặc biệt là vùng từ 98-148 của TnI, đóng vai trò thiết yếu trong việc liên kết với miền N của TnC và điều hòa sự co cơ.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Introduction
• Results
• Expression, purification, and initial conformational analyses
• Functional analyses
• Limited proteolysis and MS analyses
• Small angle X-ray scattering experiments
• SAXS modelling
• Discussion
• The chimeras were folded and functional
• Structural insights on the region comprising the last residues of Tnl
• Final comments
• Experimental procedures
• Site-directed mutagenesis
• Protein purification
• Spectroscopic experiments
• ATPase activity and actin-binding experiments
• Limited proteolysis and MALDI-TOF-MS
• Small angle X-ray scattering experiments
• Acknowledgements
• References