Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 8 trang
Dung lượng: 178 KB

Giới thiệu nội dung

Kinetic and biochemical analyses on the reaction mechanism of a bacterial ATP-citrate lyase

Tác giả: Tadayoshi Kanao, Toshiaki Fukui, Haruyuki Atomi and Tadayuki Imanaka

Lĩnh vực: Department of Synthetic Chemistry and Biological Chemistry, Graduate School of Engineering, Kyoto University, Japan

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích động học và cơ chế phản ứng của enzyme ATP-citrate lyase (ACL) từ vi khuẩn lưu huỳnh xanh Chlorobium limicola (Cl-ACL). Enzyme này là một thành phần quan trọng trong chu trình axit tricarboxylic khử (RTCA) cố định carbon dioxide. Các phân tích động học cho thấy Cl-ACL thể hiện động học Michaelis-Menten điển hình đối với ATP, nhưng lại có sự hợp lực âm mạnh mẽ đối với citrate, cho phép enzyme này điều chỉnh cả hướng và dòng chảy carbon của chu trình RTCA. Nghiên cứu cũng đi sâu vào phân tích sinh hóa để làm sáng tỏ cơ chế phản ứng, bao gồm vai trò của gốc His273 trong trung tâm xúc tác và khả năng phosphoryl hóa/khử phosphoryl hóa của enzyme.

Mục lục chi tiết:

  • Kinetic and biochemical analyses on the reaction mechanism of a bacterial ATP-citrate lyase
  • Materials and Methods
  • Purification of the recombinant Cl-ACL
  • Assay of enzyme activity
  • Site-directed mutagenesis
  • Phosphorylation of ACL
  • Results
  • Purification of Cl-ACL from recombinant E. coli
  • Kinetic analysis of Cl-ACL
  • Nucleotide dependency
  • A single mutation H273A in AclA
  • Phosphorylation of Cl-ACL
  • Subunit dissociation of Cl-ACL
  • Phosphorylation of AclA with or without AclB
  • Examination of the inhibitory effect of ADP
  • Discussion
  • References