Báo cáo Y học: Isolation, enzymatic properties, and mode of action of an exo-1,3-b-glucanase from Trichoderma viride

Isolation, Enzymatic Properties, and Mode of Action of an Exo-1,3-β-Glucanase from Trichoderma viride

Tác giả: Anna A. Kulminskaya, Karl K. Thomsen, Konstantin A. Shabalin, Irina A. Sidorenko, Elena V. Eneyskaya, Andrew N. Savel’ev, Kirill N. Neustroev

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập và đặc tính hóa một enzyme exo-1,3-β-glucanase từ dịch lọc nuôi cấy của nấm Trichoderma viride AZ36. Enzyme này đã được xác định có hoạt tính cao đối với laminarins, curdlan và các oligoglucoside 1,3-β, nhưng hoạt động chậm hơn đối với các oligoglucoside 1,3-1,4-β. Nghiên cứu đã xác định trình tự N-terminal của enzyme, phân tích các đặc tính enzyme bao gồm pH và nhiệt độ tối ưu, cũng như các thông số động học Michaelis-Menten. Phương thức hoạt động và đặc tính của enzyme đã được làm sáng tỏ thông qua phân tích sản phẩm thủy phân và phổ NMR. Kết quả cho thấy enzyme có hoạt tính exo, giải phóng glucose từ đầu không khử của chuỗi cơ chất và thực hiện quá trình thủy phân với sự đảo ngược cấu hình anomeric. Nghiên cứu cũng đã xây dựng mô hình cấu trúc vị trí gắn kết cơ chất của enzyme, cho thấy sự hiện diện của ít nhất năm vị trí gắn kết cho các gốc đường.

Mục lục chi tiết:

• Isolation, enzymatic properties, and mode of action of an exo-1,3-β-glucanase from Trichoderma viride
• MATERIALS AND METHODS
• Substrates
• General methods
• Growth conditions
• Purification of the exo-1,3-β-glucanase
• Enzyme assays
• Enzyme specificity
• Determination of the stereochemical course of hydrolysis
• RESULTS AND DISCUSSION
• Enzyme purification
• General properties
• Effect of metal ions, PHMB, and EDTA on the exo-1,3-β-glucanase activity towards laminarin
• Mode of action in the hydrolysis of laminarins
• Subsite stucture of the active center
• Stereochemical course of action
• Mode of action in the hydrolysis of laminarins
• REFERENCES