Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 421 KB

Giới thiệu nội dung

Irregular dimerization of guanylate cyclase-activating protein 1 mutants causes loss of target activation

Tác giả: Ji-Young Hwang, Ramona Schlesinger, and Karl-Wilhelm Koch

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của vùng EF-hand 1 trong protein cảm biến canxi guanylate cyclase-activating protein 1 (GCAP-1) đối với sự gắn kết canxi, biến đổi cấu trúc và hoạt hóa mục tiêu. Các đột biến được tạo ra trong vùng EF-hand 1 của GCAP-1 để kiểm tra ảnh hưởng của chúng đến khả năng gắn kết canxi, sự thay đổi cấu trúc theo nồng độ canxi và khả năng hoạt hóa enzyme guanylate cyclase. Kết quả cho thấy các đột biến này, đặc biệt là việc thay thế trình tự Cys-Pro bằng Gly, dẫn đến sự mất khả năng hoạt hóa mục tiêu mặc dù các biến đổi cấu trúc phụ thuộc canxi vẫn được duy trì. Quan trọng hơn, các đột biến này thúc đẩy sự hình thành dimer không hoạt động của protein, điều này được cho là nguyên nhân chính dẫn đến việc mất khả năng tương tác và hoạt hóa guanylate cyclase.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Experimental procedures
  • Construction of mutants CPG-GCAP-1 and CaM-GCAP-1
  • Preparation of ROS
  • Expression of GCAPS
  • Purification of GCAP-1 wild-type and mutants
  • 45Ca2+-binding assay
  • Size exclusion chromatography
  • Fluorescence spectroscopy
  • Limited proteolysis of GCAPs
  • Results
  • Ca2+-binding to GCAP-1 mutants
  • GCAP-1 mutants have lost activating properties
  • Mutations in EF-hand 1 of GCAP-1 causes dimerization
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • References