Báo cáo khoa học: Identification of multiple isoforms of the cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit in the bivalve mollusc Mytilus galloprovincialis

Identification of Multiple Isoforms of the cAMP-Dependent Protein Kinase Catalytic Subunit in the Bivalve Mollusc Mytilus Galloprovincialis

Tác giả: José R. Bardales, Ulf Hellman, J. A. Villamarín

Lĩnh vực: Biochemistry, Molecular Biology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định và phân lập các dạng đồng phân (isoforms) khác nhau của tiểu đơn vị xúc tác (C-subunit) thuộc enzyme protein kinase phụ thuộc cAMP (PKA) từ mô cơ khép và mô áo của trai biển Mytilus galloprovincialis. Các phương pháp sắc ký trao đổi ion, hoạt tính protein kinase, nhận dạng kháng thể và phân tích khối phổ đã được sử dụng để xác định các dạng đồng phân này. Kết quả cho thấy sự tồn tại của nhiều dạng đồng phân C-subunit, một số có thể đặc trưng cho từng loại mô và có sự khác biệt nhỏ về khối lượng phân tử biểu kiến. Phân tích cho thấy các dạng đồng phân này có thể phát sinh từ quá trình nối tắt thay thế (alternative splicing). Một số trình tự peptide từ các dạng đồng phân này cho thấy mức độ tương đồng cao với dạng Ca của động vật có vú, bao gồm các cấu trúc quan trọng cho chức năng xúc tác. Tuy nhiên, các thông số động học dường như không có sự khác biệt đáng kể giữa các dạng đồng phân khi sử dụng peptide tổng hợp làm cơ chất. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng các dạng đồng phân C-subunit tách chiết từ mô áo có khả năng khác nhau trong việc phosphoryl hóa các protein có trong chiết xuất mô áo.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Introduction
• Results
• Separation of different isoforms of the C-subunit
• Characterization of C-subunit isoforms
• Structural analysis of C-subunit isoforms
• Kinetic characterization of C-subunit isoforms and protein phosphorylation
• In vitro phosphorylation of proteins from mussel extracts by C-subunit isoforms
• Discussion
• Experimental procedures
• Molluscs
• Mussel extracts
• Separation of C-subunit isoforms
• Assay of C-subunit activity and determination of kinetic parameters
• Phosphorylation of mussel proteins by purified C-subunit isoforms
• SDS/PAGE and western blotting
• MS
• Acknowledgements
• References