Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 286 KB

Giới thiệu nội dung

Identification of a gene encoding Lon protease from Brevibacillus thermoruber WR-249 and biochemical characterization of its thermostable recombinant enzyme

Tác giả: Alan Y.-L. Lee, San-San Tsay, Mao-Yen Chen, và Shih-Hsiung Wu

Lĩnh vực: Sinh hóa, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này báo cáo việc phân lập và đặc tính hóa gen mã hóa enzyme Lon protease chịu nhiệt từ vi khuẩn Brevibacillus thermoruber WR-249. Enzyme tái tổ hợp (Bt-Lon) được biểu hiện và tinh sạch, cho thấy cấu trúc lục phân và hoạt tính ATPase tối ưu ở 70°C, trong khi hoạt tính peptidase và gắn DNA đạt tối ưu ở 50°C. Bt-Lon thể hiện hoạt tính giống chaperone, bảo vệ protein khỏi sự kết tụ mà không cần ATP, và có khả năng gắn DNA. Nghiên cứu cũng so sánh các yếu tố góp phần vào tính chịu nhiệt của protein này với các enzyme Lon protease khác.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và phương pháp
  • Đặc điểm vi khuẩn và điều kiện nuôi cấy
  • Chủng vi khuẩn, enzyme và hóa chất
  • Thao tác và phân tích trình tự DNA
  • Nhân bản phân tử gen Bt-lon của Br. thermoruber
  • Thí nghiệm sốc nhiệt và Northern blot
  • Chuẩn bị các cấu trúc biểu hiện Bt-Lon
  • Biểu hiện và tinh sạch Bt-Lon
  • Sắc ký lọc gel phân tích
  • Phân tích hoạt tính peptidase và ATPase
  • Thí nghiệm điện di dịch chuyển (EMSA)
  • Kiểm tra hoạt tính giống chaperone
  • Phân tích phổ CD
  • Biến tính nhiệt và chuyển đổi biến tính
  • Số hiệu truy cập trình tự nucleotide
  • Kết quả
  • Nhận diện và phân tích trình tự của Bt-lon
  • Phân tích vùng promoter và phiên mã do nhiệt gây ra của Bt-lon
  • Đặc tính hóa Bt-Lon
  • Thảo luận
  • Tóm tắt
  • Tài liệu tham khảo