Báo cáo khoa học: HIP/PAP, a C-type lectin overexpressed in hepatocellular carcinoma, binds the RIIa regulatory subunit of cAMP-dependent protein kinase and alters the cAMP-dependent protein kinase signalling

HIP/PAP, a C-type lectin overexpressed in hepatocellular carcinoma, binds the RIIα regulatory subunit of cAMP-dependent protein kinase and alters the cAMP-dependent protein kinase signalling

Tác giả: France Demaugre, Yannick Philippe, Sokavuth Sar, Bernard Pileire, Laurence Christa, Chantal Lasserre and Christian Brechot

Lĩnh vực: Biochemistry, Molecular Biology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này xác định được rằng protein HIP/PAP, một loại lectin C-type được biểu hiện quá mức trong ung thư biểu mô tế bào gan, tương tác với tiểu đơn vị điều hòa RIIα của protein kinase phụ thuộc cAMP (PKA). Sự tương tác này dẫn đến việc HIP/PAP làm thay đổi tín hiệu PKA. Các nhà nghiên cứu đã chứng minh sự hiện diện của cả hai protein trong cùng một khoang tế bào con, cho thấy khả năng tương tác trong môi trường sinh lý. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng hoạt động PKA cơ bản tăng lên ở các tế bào biểu hiện HIP/PAP, và hoạt động luciferase được tăng cường trong các tế bào biểu hiện HIP/PAP với một plasmid báo cáo có yếu tố phản ứng cAMP. Những phát hiện này đề xuất một cơ chế mới cho hoạt động sinh học của lectin HIP/PAP, liên quan đến việc điều chỉnh tín hiệu PKA.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Plasmid constructs
• Production, purification and labelling of Flag-HMK-HIP/PAP(29-175)
• Screening of a human HCC cDNA λgt11 library with [³²P]Flag-HMK-HIP/PAP(29-175)
• Cell culture and transfection
• Analysis of HIP/PAP in transiently HIP/PAP expressing Chang cells
• Cell fractionation
• Immunofluorescence and confocal analysis
• Phosphorylation of recombinant HIP/PAP by PKA
• PKA activity in Chang cells expressing HIP/PAP
• Reporter gene assays
• Statistical analysis
• Results
• Identification of the RIIα regulatory subunit of PKA as a partner of HIP/PAP
• HIP/PAP is phosphorylated by PKA
• Discussion
• Acknowledgements
• References