Báo cáo khoa học: Functionally active fusion protein of the novel composite cytokine CLC/soluble CNTF receptor

Functionally Active Fusion Protein of the Novel Composite Cytokine CLC/Soluble CNTF Receptor

Tên đề tài: Functionally active fusion protein of the novel composite cytokine CLC/soluble CNTF receptor

Tác giả: Catherine Guillet, Eric Lelièvre, Hélène Plun-Favreau, Josy Froger, Marie Chabbert, Jacques Hermann, Amelie Benoit de Coignac, Jean-Yves Bonnefoy, Hugues Gascan, Jean-François Gauchat, and Greg Elson

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Miễn dịch học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày việc tạo ra và đặc tính hóa một protein dung hợp dạng đơn chuỗi (monomeric fusion protein) kết hợp cytokine có hoạt tính sinh học CLC (cardiotrophin-like cytokine) với thụ thể hòa tan của yếu tố thần kinh lông mao (sCNTFR – soluble ciliary neurotrophic factor receptor). Protein dung hợp này, được đặt tên là CC-FP, được chứng minh là có khả năng tiết ra hiệu quả từ tế bào động vật có vú đã được chuyển gen, đồng thời thể hiện hoạt tính mạnh mẽ hơn so với phức hợp CLC/sCNTFR tự nhiên. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng CC-FP có thể cạnh tranh với CNTF trong việc gắn kết với thụ thể, cho thấy sự chia sẻ epitope gắn kết giữa hai cytokine này. Phân tích các sự kiện truyền tín hiệu hạ nguồn đã tiết lộ sự tuyển dụng của các yếu tố phiên mã như STAT3, Akt và các con đường MAPK bởi CC-FP. Do đó, protein dung hợp CLC/sCNTFR dạng đơn chuỗi này được xem là một công cụ mạnh mẽ để nghiên cứu vai trò sinh học của cytokine CLC.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Reagents
• Cell cultures
• Construction of a single chain CLC/sCNTFR fusion protein (CC-FP)
• Protein purification and Western blotting
• Gel filtration
• Protein modeling
• Tyrosine phosphorylation analysis
• Cell proliferation assays
• KB cell IL-6 production assay
• Gene reporter assay
• FACS analysis and cytokine displacement
• Results
• Discussion
• Acknowledgements
• References