Efficient site directed in vitro mutagenesis using ampicillin selection

Efficient Site-Directed In Vitro Mutagenesis Using Ampicillin Selection

Tác giả: Martin K. Lewis and David V. Thompson

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Công nghệ sinh học

Nội dung tài liệu:

Bài báo mô tả một phương pháp hiệu quả cao cho kỹ thuật tạo đột biến tại vị trí (site-directed mutagenesis) trong ống nghiệm. Phương pháp này sử dụng vector phagemid mới, pSELECT-1, kết hợp với một kỹ thuật chọn lọc độc đáo. Vector pSELECT-1 có một gen kháng ampicillin bị lỗi, có thể được phục hồi chức năng thông qua việc sử dụng một oligonucleotide sửa lỗi. Kỹ thuật này liên kết oligonucleotide sửa lỗi ampicillin với một oligonucleotide gây đột biến, tạo điều kiện cho việc chọn lọc các dòng mang đột biến mong muốn. Phương pháp này đã đạt được hiệu quả đột biến cao, từ 60-90% trong các thử nghiệm.

Mục lục chi tiết:

• ABSTRACT
• INTRODUCTION
• MATERIALS AND METHODS
• Construction of pSELECT-1
• RESULTS
• Reversion of pSELECT-1 to Ampicillin Resistance
• Coupling the Ampicillin Repair Oligonucleotide to a Second Mutagenic Oligonucleotide
• Testing the Mutagenesis System with pSELECT-Control
• Testing pSELECT-1 with an Insert
• The Effect of Oligonucleotide Phosphorylation
• Multiple Simultaneous Mutations
• DISCUSSION
• REFERENCES