Báo cáo khoa học: Deletion of Phe508 in the first nucleotide-binding domain of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator increases its affinity for the heat shock cognate 70 chaperone

Deletion of Phe508 in the first nucleotide-binding domain of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator increases its affinity for the heat shock cognate 70 chaperone

Tác giả: Toby S. Scott-Ward và Margarida D. Amaral

Lĩnh vực: Sinh hóa phân tử, Sinh học cấu trúc

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá sự tương tác giữa miền liên kết nucleotide đầu tiên (NBD1) của bộ điều hòa dẫn truyền xuyên màng xơ nang (CFTR) và protein sốc nhiệt tương đồng 70 (Hsc70). Đặc biệt, bài báo tập trung vào ảnh hưởng của đột biến F508del, nguyên nhân chính gây bệnh xơ nang, đến ái lực liên kết của NBD1 với Hsc70. Sử dụng kỹ thuật cộng hưởng plasmon bề mặt (SPR), các nhà nghiên cứu đã định lượng sự tương tác này và phát hiện ra rằng sự hiện diện của đột biến F508del làm tăng đáng kể ái lực của NBD1 với Hsc70. Ngoài ra, nghiên cứu còn xem xét vai trò của các nucleotide adenine và các hợp chất điều chỉnh (correctors) trong việc điều chỉnh tương tác này, cung cấp những hiểu biết sâu sắc về cơ chế phân tử của bệnh xơ nang và tiềm năng phát triển các liệu pháp mới.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Interaction of purified NBD1 and Hsc70 under the SPR conditions
• Analysis of stability of NBD1 under the SPR interaction conditions
• Assessment of optimal conditions for studying the Hsc70-NBD1 interaction by SPR
• Assessment of the impact of F508del on the NBD1-Hsc70 interaction
• Analysis of the effect of adenine nucleotides on the binding of NBD1 to Hsc70
• The effect of small molecule compounds on the NBD1-Hsc70 interaction
• Discussion
• Both wt-NBD1 and F508del-NBD1 bind Hsc70
• F508del increases the affinity of CFTR NBD1 for Hsc70
• Binding sites on NBD1 promoting Hsc70 interaction
• Effect of ATP on the Hsc70-NBD1 interaction
• Effect of small molecules on the interaction of Hsc70 with F508del-NBD1
• Experimental procedures
• Reagents
• Biochemical analysis of purified NBD1 and Hsc70
• Spectroscopic analysis of NBD1
• SPR
• Data analysis
• Statistical analysis
• Acknowledgements
• References