Crystal structure of salt-tolerant glutaminase from Micrococcus luteus K-3 in the presence and absence of its product L-glutamate and its activator Tris

Crystal Structure Of Salt-Tolerant Glutaminase From Micrococcus Luteus K-3 In The Presence And Absence Of Its Product L-Glutamate And Its Activator Tris

Tác giả: Kazuaki Yoshimune, Yasuo Shirakihara, Mamoru Wakayama, and Isao Yumoto

Lĩnh vực: Structural Biology Center, National Institute of Genetics, Mishima, Shizuoka, Japan; Department of Biotechnology, Faculty of Life Science, Ritsumeikan University, Kusatsu, Shiga, Japan

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này trình bày cấu trúc tinh thể của glutaminase kháng muối từ vi khuẩn Micrococcus luteus K-3 (Mglu). Cấu trúc của enzyme nguyên vẹn đã được xác định trong các điều kiện khác nhau: không có chất phụ gia (N), có Tris (T), có L-glutamate (G) và có cả Tris cùng L-glutamate (TG). Việc bổ sung L-glutamate và Tris đã làm giảm đáng kể các vùng không có cấu trúc trong phân tử enzyme. Phân tích cho thấy Mglu có một túi gắn kết chất nền lớn hơn, phù hợp với tính đặc hiệu cao với L-glutamine và giải thích khả năng kháng muối của enzyme này. So sánh với glutaminase nhạy cảm với muối từ Bacillus subtilis cho thấy Mglu có sự thay đổi cấu trúc nhỏ hơn khi có mặt ligand, điều này có thể liên quan đến cơ chế kháng muối.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Note
• Introduction
• Results and Discussion
• Determination of overall structure
• Active site
• Effect of L-glutamate on the structure
• Salt-tolerant mechanism
• Substrate specificity
• Effect of Tris on the structure
• Catalytic mechanism of Mglu
• Experimental procedures
• Enzyme assay
• Structural determination
• Gene cloning and purification of Bacillus glutaminase
• Acknowledgements
• References