Báo cáo khoa học: Collagen I regulates matrix metalloproteinase-2 activation in osteosarcoma cells independent of S100A4

Collagen I Regulates Matrix Metalloproteinase-2 Activation in Osteosarcoma Cells Independent of S100A4

Tác giả: Renate Elenjord, Jasmine B. Allen, Harald T. Johansen, Hanne Kildalsen, Gunbjørg Svineng, Gunhild M. Maelandsmo, Thrina Loennechen, and Jan-Olof Winberg

Lĩnh vực: Sinh hóa, Tế bào học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này điều tra tác động của sự tương tác giữa tế bào và collagen loại I lên quá trình tổng hợp và hoạt hóa metalloproteinase-2 (MMP-2), cũng như tổng hợp MT1-MMP và TIMP-1. Sử dụng mô hình in vitro với collagen sợi 3D và collagen đơn phân tử 2D, các nhà khoa học đã xem xét liệu protein liên quan đến di căn S100A4 có ảnh hưởng đến phản ứng của tế bào ung thư xương đối với hai dạng collagen này hay không. Kết quả cho thấy sự gắn kết của tế bào ung thư xương với collagen sợi 3D làm giảm hoạt hóa proMMP-2, trong khi đó, sự gắn kết với collagen đơn phân tử 2D lại làm tăng lượng MMP-2 hoạt động. Tác động của collagen lên hoạt hóa proMMP-2 là độc lập với mức độ S100A4 nội sinh, nhưng quá trình tổng hợp TIMP-1 lại phụ thuộc vào S100A4. Nghiên cứu kết luận rằng quá trình tổng hợp và hoạt hóa MMP-2 bị ảnh hưởng bởi sự tương tác giữa tế bào ung thư xương và collagen loại I ở cả dạng sợi và đơn phân tử.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Abbreviations
• Results
• Cell morphology and actin cytoskeleton structure
• Cell viability
• S100A4 expression is not affected by the cells binding to collagen I
• Binding of cells to fibrillar 3D collagen I results in decreased proMMP-2 activation and reduced MT1-MMP expression
• Cell binding to monomeric 2D collagen I increased the amount of fully activated MMP-2
• Cell binding to monomeric 2D collagen I results in an S100A4-dependent decrease in TIMP-1 expression
• TIMP-1 prevents the second step in the MT1-MMP-induced activation of proMMP-2
• Investigation of mechanisms that may explain the increased activation of MMP-2 when cells are attached to monomeric collagen I
• Discussion
• Materials and methods
• Cell cultures
• Preparation of wells for cell experiments
• Cell viability assay
• Phalloidin staining of actin filaments
• Production of conditioned media for MMP and TIMP determination
• Isolation of cell membranes
• Isolation of cell lysates
• Activation of MMP-2 by cell membranes
• Activation of MMP-2 by recombinant MT1-MMP
• Biotinylation of cell-surface proteins
• Gelatin zymography
• Western blot analysis
• ELISA
• Legumain activity
• Statistics
• Acknowledgements
• References