Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 259 KB

Giới thiệu nội dung

Characterization of recombinant forms of the yeast Gas1 protein and identification of residues essential for glucanosyltransferase activity and folding

Tác giả: Cristina Carotti, Enrico Ragni, Oscar Palomares, Thierry Fontaine, Gabriella Tedeschi, Rosalía Rodríguez, Jean Paul Latgé, Marina Vai and Laura Popolo

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Công nghệ sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc biểu hiện và đặc trưng hóa các dạng tái tổ hợp của protein Gas1 từ nấm men Saccharomyces cerevisiae, một glycoprotein neo bằng GPI thuộc họ GH72, có vai trò trong việc lắp ráp và hình thái thành tế bào nấm men. Các nhà nghiên cứu đã biểu hiện các dạng hòa tan của Gas1p trong nấm men Pichia pastoris, thu được sản lượng đáng kể và chứng minh hoạt tính β-(1,3)-glucanosyltransferase. Nghiên cứu cũng xác định các gốc axit amin thiết yếu cho hoạt tính xúc tác, bao gồm E161 và E262, và vai trò quan trọng của cysteine C74 trong việc gấp nếp và trưởng thành của protein GPI-neo.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và phương pháp
  • Chủng và điều kiện nuôi cấy
  • Xây dựng các vector biểu hiện
  • Biến đổi gen E161 và E262
  • Biến đổi gen C74, C103 và C265
  • Biểu hiện và đặc trưng hóa các protein Gas1 tái tổ hợp
  • Biểu hiện và làm sạch các protein Gas1 được gắn thẻ His
  • Xử lý bằng Endo-β-N-acetylglucosaminidase H
  • Điện di và các quy trình miễn dịch blotting
  • Thí nghiệm đánh dấu và miễn dịch kết tủa
  • Phân tích phổ
  • Định lượng các cầu disulfide và nhóm sulfhydryl tự do
  • Kết quả và thảo luận
  • Sản xuất các dạng hòa tan tái tổ hợp của Gas1p trong P. pastoris
  • Các đặc điểm bảo tồn của miền xúc tác của Họ GH72 và xác định các gốc xúc tác trong Gas1p
  • Vai trò thiết yếu của C74 trong việc gấp nếp và ổn định của Gas1p neo bằng GPI
  • Kết luận
  • Tài liệu tham khảo
  • Lời cảm ơn