Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 13 trang
Dung lượng: 2 MB

Giới thiệu nội dung

Characterization Of A β-N-Acetylhexosaminidase And A β-N-Acetylglucosaminidase/β-Glucosidase From Cellulomonas Fimi

Tác giả: Christoph Mayer, David J. Vocadlo, Melanie Mah, Karen Rupitz, Dominik Stoll, R. A. J. Warren, Stephen G. Withers

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc xác định và phân tích hai enzyme nội bào từ vi khuẩn đất Gram dương Cellulomonas fimi: một enzyme β-N-acetylhexosaminidase thuộc họ 20 (Hex20) và một enzyme β-N-acetylglucosaminidase/β-glucosidase mới thuộc họ 3 (Nag3). Enzyme Nag3 cho thấy hoạt tính trên cả hai loại cơ chất β-N-acetyl-D-glucosaminide và β-D-glucoside, cho thấy nó là enzyme β-glycosylase đầu tiên được mô tả có khả năng này và gợi ý về mối liên hệ tiến hóa thú vị giữa các enzyme β-N-acetylglucosaminidase và β-glucosidase thuộc họ 3. Enzyme Hex20, thuộc họ 20, thể hiện đặc tính đặc hiệu hơn đối với nhóm acetamido ở vị trí C2 của cơ chất và không thể phân cắt β-glucosides. Cả hai enzyme đã được biểu hiện dị thể trong E. coli, tinh sạch và đặc tính hóa, cho thấy sự khác biệt đáng kể về hoạt tính và động học enzyme.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Kết quả
  • Phát hiện hoạt tính β-N-acetylglucosaminidase trong dịch chiết tế bào Cellulomonas fimi
  • Sàng lọc thư viện gen Cellulomonas fimi
  • Căn chỉnh trình tự và phân loại vào họ 20 glycoside hydrolases
  • Căn chỉnh trình tự và phân loại vào họ 3 glycoside hydrolases
  • Biểu hiện quá mức, tinh sạch và xác định trình tự N-terminal của protein
  • Đặc tính hóa các enzyme đã tinh sạch
  • Phân tích động học
  • Độ ổn định và ảnh hưởng của pH
  • MS và đánh dấu
  • Thảo luận
  • Quy trình thực nghiệm
  • Vật liệu
  • Chủng vi khuẩn, plasmid và phage
  • Sàng lọc và phân lập các gen Cellulomonas fimi mã hóa N-acetylglucosaminidase
  • Xây dựng pETcfnag3 và pETcfhex20
  • Sản xuất, tinh sạch và xác định trình tự N-terminal của các protein tái tổ hợp
  • Đặc tính hóa sinh học
  • Phân tích động học
  • Độ ổn định và ảnh hưởng của pH
  • Tài liệu tham khảo
  • Tài liệu bổ sung