Báo cáo Y học: Assignment of molecular properties of a superactive coagulation factor VIIa variant to individual amino acid changes

Assignment of molecular properties of a superactive coagulation factor VIla variant to individual amino acid changes

Tác giả: Egon Persson and Ole H. Olsen

Lĩnh vực: Haemostasis Biology and Medicinal Chemistry Research IV, Novo Nordisk A/S, Måløv, Denmark

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này phân tích các biến thể của yếu tố đông máu VIIa (FVIIa) đã được biến đổi ở một hoặc hai vị trí để đánh giá tầm quan trọng tương đối của từng thay thế axit amin. Các đột biến E296V và M298Q đã tạo ra hoạt tính amidolytic nội tại tăng lên. Khi kết hợp hai đột biến này, hoạt tính amidolytic của biến thể E296V/M298Q-FVIIa gần bằng với biến thể đột biến ba vị trí. Mức độ hoạt tính amidolytic có tương quan với tốc độ ức chế bởi antithrombin (AT). Sự phụ thuộc vào Ca²⁺ của hoạt tính amidolytic nội tại bị suy giảm đáng kể khi có đột biến E296V, và ảnh hưởng này rõ rệt nhất ở biến thể đột biến ba vị trí. Đột biến M298Q là cần thiết để tăng cường hoạt hóa yếu tố X (FX). Sự hiện diện đồng thời của các đột biến V158D, E296V và M298Q mang lại hoạt tính nội tại cao nhất và là yếu tố thiết yếu để đạt được sự gia tăng hoạt tính huyết tương mạnh mẽ hơn so với hoạt tính amidolytic.

Mục lục chi tiết:

• Assignment of molecular properties of a superactive coagulation factor VIla variant to individual amino acid changes
• MATERIALS AND METHODS
• Proteins, chemical reagents and standard methods
• Mutagenesis and preparation of FVIla mutants
• Activity and inhibition assays
• RESULTS
• Enzymatic activity of FVIla variants
• Inhibition of FVIla variants by antithrombin and potassium cyanate
• DISCUSSION