Effects of the G376E and G157D mutations on the stability of yeast enolase – a model for human muscle enolase deficiency

Effects of the G376E and G157D mutations on the stability of yeast enolase – a model for human muscle enolase deficiency

Tên đề tài: Effects of the G376E and G157D mutations on the stability of yeast enolase – a model for human muscle enolase deficiency

Tác giả: Songping Zhao, Bonny S. F. Choy, Mary J. Kornblatt

Lĩnh vực: Department of Chemistry and Biochemistry, Concordia University, Montreal, Canada

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc khảo sát ảnh hưởng của hai đột biến G376E và G157D lên cấu trúc và độ ổn định của men enolase, sử dụng men enolase của nấm men làm mô hình cho hội chứng thiếu men enolase ở cơ bắp người. Hội chứng thiếu men enolase ở cơ bắp người, được báo cáo lần đầu vào năm 2001, liên quan đến hai gen đột biến cho β-enolase. Các đột biến này thay đổi glycine tại vị trí 156 thành aspartate và glycine tại vị trí 374 thành glutamate. Để hiểu rõ hơn tác động của những thay đổi này, các nhà nghiên cứu đã tạo ra các đột biến tương ứng G157D và G376E trên men enolase của nấm men. Kết quả cho thấy cả hai dạng đột biến đều được gấp nếp đúng cách, tuy nhiên lại kém bền vững hơn so với men enolase dạng hoang dã khi đo đạc bằng phương pháp phân tích nhiệt. Ngoài ra, các dạng đột biến này cũng cho thấy sự gia tăng về giá trị Ka cho sự phân ly tiểu đơn vị. Khi hoạt động ở 37 °C trong môi trường có muối, cả hai dạng đột biến đều có xu hướng phân ly một phần và bị phân cắt bởi trypsin một cách mạnh mẽ. Ngược lại, men enolase dạng hoang dã dưới cùng điều kiện lại hoàn toàn ở dạng dimer và chỉ bị phân cắt bởi trypsin một cách nhẹ nhàng. Tuy nhiên, men enolase dạng hoang dã cũng bị phân cắt đáng kể khi nó bị phân ly một phần. Việc xác định các vị trí phân cắt và các nghiên cứu phổ học về men enolase đã làm sáng tỏ một số khác biệt về cấu trúc giữa dạng dimer và dạng monomer của enzyme này.

Mục lục chi tiết:

• Preliminary characterization
• Secondary and tertiary structure
• Quaternary structure and Ka value for dissociation
• Thermal denaturation
• Proteolytic digestion
• Discussion
• Experimental procedures
• Acknowledgements
• References