Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 82 trang
Dung lượng: 2 MB

Giới thiệu nội dung

Nghiên Cứu Biểu Hiện Và Đánh Giá Hoạt Tính Sinh Miễn Dịch Của Kháng Nguyên P30 Và P54 Tái Tổ Hợp Của Virus Gây Bệnh Dịch Tả Lợn Châu Phi (African Swine Fever Virus) Trên Cây Thuốc Lá Nicotiana Benthamiana Domin

Tác giả: Nguyễn Thị Trà

Lĩnh vực: Sinh học

Nội dung tài liệu:

Luận văn này tập trung nghiên cứu về virus gây bệnh Dịch tả lợn Châu Phi (ASFV), một tác nhân gây bệnh nghiêm trọng với tỷ lệ tử vong cao. Do tính chất phức tạp của virus, việc phát triển vaccine phòng bệnh vẫn còn là một thách thức lớn. Nghiên cứu này đề xuất hướng sản xuất vaccine tiểu đơn vị trên hệ thống biểu hiện ở thực vật, một phương pháp được chứng minh là an toàn, hiệu quả và tiềm năng. Cụ thể, đề tài tập trung vào việc thiết kế, biểu hiện và tinh sạch các kháng nguyên tái tổ hợp p30 và p54 của ASFV trên cây thuốc lá Nicotiana benthamiana, sau đó đánh giá khả năng gây đáp ứng miễn dịch trên chuột. Kết quả nghiên cứu này sẽ tạo cơ sở khoa học và thực nghiệm cho việc phát triển các loại vaccine hiệu quả, góp phần phòng chống dịch bệnh.

Mục lục chi tiết:

  • MỞ ĐẦU
  • Chương 1: TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU
    • 1.1. Bệnh dịch tả lợn Châu Phi
    • 1.2. Sự lây truyền và ảnh hưởng nguy hiểm của virus gây bệnh dịch tả lợn Châu Phi.
    • 1.3. Vaccine phòng bệnh dịch tả lợn Châu Phi
    • 1.4. Đặc điểm và vai trò của các protein p54 và p30
    • 1.5. Hệ thống biểu hiện protein tái tổ hợp tạm thời ở thực vật.
  • Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
    • 2.1. Đối tượng, phạm vi và vật liệu nghiên cứu.
      • 2.1.1. Đối tượng, phạm vi nghiên cứu
      • 2.1.2. Vật liệu nghiên cứu
    • 2.2. Phương pháp nghiên cứu..
      • 2.2.1. Phương pháp thu thập thông tin lựa chọn gen mã hóa protein ASFV, tối ưu mã biểu hiện
      • 2.2.2. Thiết kế các cấu trúc vector biểu hiện mang gen p30, p54 và tạo chủng Agrobacterium tumefacines mang vector tương ứng.
      • 2.2.3. Phương pháp biểu hiện tạm thời ở thực vật bằng Agro-infiltration.
      • 2.2.4. Phương pháp tinh sạch và xác định đặc điểm cấu trúc của các kháng nguyên p30 và p54 ASFV tái tổ hợp từ thực vật
      • 2.2.5. Phương pháp gây đáp ứng miễn dịch trên chuột.
      • 2.2.6. Đánh giá hiệu giá kháng thể IgG đặc hiệu ASFV bằng phản ứng Elisa và Western blot.
      • 2.2.7. Phương pháp xử lí thống kê
  • Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
    • 3.1. Thiết kế các dạng cấu trúc vector biểu hiện mang gen mã hóa hai kháng nguyên p30 và p54 ASFV của các chủng virus ASFV đang lưu hành ở Việt Nam dung hợp với các motif khác nhau và tạo chủng Agrobacterium mang vector tương ứng
      • 3.1.1. Thu thập thông tin, tối ưu mã biểu hiện của gen mã hoá protein p30 và p54 của ASFV từ các chủng virus ASFV đang lưu hành ở Việt Nam và tổng hợp nhân tạo các trình tự gen trên
      • 3.1.2. Thiết kế các dạng cấu trúc vector biểu hiện mang gen mã hóa các kháng nguyên p30 và p54 ASFV dung hợp với các motif khác nhau và tạo chủng Agrobacterium mang vector tương ứng
    • 3.2. Biểu hiện tạm thời protein tái tổ hợp ASFV p30, p54 trên cây thuốc lá Nicotiana benthamiana
      • 3.2.1. Chuẩn bị cây thuốc lá Nicotiana benthamiana
      • 3.2.2. Đánh giá khả năng biểu hiện tạm thời của protein tái tổ hợp ASFV p30, p54 trên cây thuốc lá Nicotiana benthamiana
    • 3.3. Tinh sạch và xác định đặc điểm của các kháng nguyên p30 và p54 tái tổ hợp ASFV tiềm năng.
      • 3.3.1. Tinh sạch và xác định đặc điểm của các kháng nguyên p30 tái tổ hợp ASFV.
      • 3.3.2. Tinh sạch và xác định đặc điểm của các kháng nguyên p54 tái tổ hợp ASFV.
    • 3.4. Đánh giá hoạt tính sinh miễn dịch của các kháng nguyên p30 và p54 tái tổ hợp ASFV tiềm năng trên chuột thí nghiệm.
      • 3.4.1. ELISA gián tiếp và Western blot phát hiện kháng thể IgG đặc hiệu kháng nguyên p30pII-tp/virus trong huyết thanh.
      • 3.4.2. ELISA gián tiếp và Western blot phát hiện kháng thể IgG đặc hiệu kháng nguyên p54pII-tp/virus trong huyết thanh.
  • KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
    • KẾT LUẬN
    • KIẾN NGHỊ
  • DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO