Regulation Of Calpain B From Drosophila melanogaster By Phosphorylation

Regulation Of Calpain B From Drosophila melanogaster By Phosphorylation

Tác giả: László Kovács, Anita Alexa, Eva Klement, Endre Kókai, Ágnes Tantos, Gergö Gógl, Tamás Sperka, Katalin F. Medzihradszky, József Tözsér, Viktor Dombrádi, Péter Friedrich

Lĩnh vực: Sinh hóa, Sinh học phân tử, Di truyền học

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này tập trung vào việc điều chỉnh hoạt động của Calpain B, một enzyme quan trọng trong loài *Drosophila melanogaster*, thông qua quá trình phosphoryl hóa. Các nhà nghiên cứu đã điều tra sự phosphoryl hóa *in vitro* của protein Calpain B tái tổ hợp bởi protein kinase A (PKA) và các protein kinase điều hòa tín hiệu ngoại bào (ERK1 và ERK2). Bằng phương pháp khối phổ (MS), họ đã xác định được các vị trí phosphoryl hóa cụ thể trên enzyme, bao gồm Ser845 và Ser240 bởi PKA, và Thr747 bởi ERK. Nghiên cứu cũng cho thấy quá trình phosphoryl hóa này làm tăng tốc độ hoạt hóa tự phân của enzyme, tăng tốc độ phân giải các chất nền peptide và protein, cũng như tăng độ nhạy cảm với Ca²⁺ của enzyme. Các thí nghiệm với đột biến màng hình thức phosphoryl hóa (T747E và S845E) đã củng cố kết quả này. Quan trọng hơn, nghiên cứu đã xác minh sự phosphoryl hóa *in vivo* của Thr747 trong các tế bào S2 của *Drosophila* khi được kích thích bởi yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGF). Dữ liệu thu thập được gợi ý rằng sự kích hoạt con đường ERK bởi tín hiệu ngoại bào dẫn đến phosphoryl hóa và hoạt hóa Calpain B ở ruồi giấm.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Kết quả và Thảo luận: Phosphoryl hóa Calpain B in vitro
• Ảnh hưởng của phosphoryl hóa đến hoạt hóa và hoạt động của Calpain B
• Thử nghiệm huỳnh quang với cơ chất peptide
• Thử nghiệm hoạt động với cơ chất protein
• Thử nghiệm tự phân
• Mô phỏng phosphoryl hóa Calpain B bằng đột biến định hướng
• Phosphoryl hóa Calpain B in vivo
• Phương pháp thực nghiệm
• Tài liệu tham khảo