Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 15 trang
Dung lượng: Đang cập nhật

Giới thiệu nội dung

Production Of A Recombinant Mouse Monoclonal Antibody In Transgenic Silkworm Cocoons

Tác giả: Masashi Iizuka, Shingo Ogawa, Atsushi Takeuchi, Shinichi Nakakita, Yuhki Kubo, Yoshitaka Miyawaki, Jun Hirabayashi, Masahiro Tomita

Lĩnh vực: Sợi tơ, kháng thể đơn dòng, sản xuất protein tái tổ hợp

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này trình bày phương pháp sản xuất kháng thể đơn dòng chuột tái tổ hợp (mAb) trong kén tằm chuyển gen. Hai dòng tằm chuyển gen đã được tạo ra, mang theo các đoạn mã hóa chuỗi L và chuỗi H của kháng thể đơn dòng chuột, dưới sự kiểm soát của bộ điều hòa phiên mã sericin-1. Phân tích protein kén cho thấy chuỗi L hoặc chuỗi H của kháng thể đã được tiết ra trong kén của mỗi dòng. Một dòng chuyển gen thứ ba, L/H, được tạo ra bằng cách lai tạo hai dòng trên, đã sản xuất hiệu quả kháng thể đơn dòng tái tổ hợp dưới dạng phức hợp tetramer H2L2 hoàn chỉnh trong kén. Kháng thể tái tổ hợp này được chiết xuất từ kén và tinh chế bằng sắc ký cột protein G. Khả năng liên kết kháng nguyên của kháng thể tái tổ hợp này tương đương với kháng thể tự nhiên được sản xuất bởi hybridoma. Phân tích cấu trúc N-glycans gắn trên kháng thể tái tổ hợp cho thấy nó chứa N-glycans loại mannose cao, hybrid và phức tạp, nhưng không phát hiện N-glycans loại paucimannose đặc trưng cho côn trùng hay các gốc fucose liên kết với GlcNAc ở lõi.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Tạo dòng tằm chuyển gen mang cDNA mã hóa kháng thể đơn dòng chuột
  • Phân tích kháng thể đơn dòng chuột tái tổ hợp trong kén
  • Định lượng mRNA chuỗi L và chuỗi H trong MSG
  • Tăng cường biểu hiện gen chuyển bằng trans-activator IE1
  • Chiết xuất và tinh chế kháng thể đơn dòng chuột tái tổ hợp từ kén
  • Đặc tính liên kết kháng nguyên của kháng thể đơn dòng tái tổ hợp
  • Cấu trúc N-glycans gắn trên kháng thể đơn dòng tái tổ hợp
  • Cấu trúc N-glycans của protein nội sinh trong kén và mô ấu trùng
  • Bàn luận
  • Quy trình thực nghiệm
  • Động vật thí nghiệm
  • Xây dựng các vector dùng để tạo dòng tằm chuyển gen
  • Phân tích protein tái tổ hợp trong kén
  • Định lượng mRNA trong tế bào MSG
  • Chiết xuất và tinh chế kháng thể đơn dòng tái tổ hợp
  • Thử nghiệm ái lực
  • Chuẩn bị PA-N-glycans
  • HPLC
  • MS
  • Xử lý bằng PNGaseF
  • Lectin blotting