Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 8 trang
Dung lượng: 179 KB

Giới thiệu nội dung

Identification and characterization of a mammalian 14-kDa phosphohistidine phosphatase

Tác giả: Pia Ek, Gunilla Pettersson, Bo Ek, Feng Gong, Jin-Ping Li and Örjan Zetterqvist

Lĩnh vực: Department of Medical Biochemistry and Microbiology, Uppsala University, Uppsala, Sweden; Department of Plant Biology, The Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala, Sweden

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc phát hiện, phân lập và xác định trình tự amino acid một phần của enzyme phosphohistidine phosphatase 14-kDa từ gan lợn, và tiếp theo là việc xác định, nhân bản và biểu hiện enzyme phosphohistidine phosphatase 14-kDa tương ứng ở người. Việc lựa chọn thành công peptide chứa phosphohistidine Suc-Ala-His(P)-Pro-Phe-pNA (phosphopeptide I) làm cơ chất thăm dò là yếu tố cần thiết cho kết quả này. Enzyme này cho thấy hoạt tính phosphatase không bị ức chế bởi axit okadaic và EDTA, gợi ý sự tồn tại của một enzyme khác biệt với các protein phosphatase 1, 2A và 2C. Enzyme đã được tinh chế đạt độ tinh khiết cao, có khối lượng phân tử khoảng 14 kDa và hoạt tính đặc hiệu cao đối với phosphopeptide I. Nghiên cứu cũng cung cấp thông tin về biểu hiện mRNA của enzyme này trong các mô khác nhau của con người, chủ yếu ở tim và cơ xương. Kết quả này cung cấp một công cụ mới để nghiên cứu quá trình phosphoryl hóa/dephosphoryl hóa histidine ở sinh vật nhân chuẩn.

Mục lục chi tiết:

  • Identification and characterization of a mammalian 14-kDa phosphohistidine phosphatase
  • EXPERIMENTAL PROCEDURES
  • Materials
  • Preparation of the phosphohistidine-containing peptide Suc-Ala-His(P)-Pro-Phe-pNA
  • Phosphatase assays
  • Preparation of porcine liver cytosol
  • Purification of phosphohistidine phosphatase from porcine liver cytosol
  • Amino acid sequencing by MS
  • RNA isolation and molecular cloning of human phosphohistidine phosphatase cDNA
  • Nucleotide sequencing
  • Expression of the human phosphohistidine phosphatase recombinant protein
  • Purification of the recombinant phosphohistidine phosphatase
  • Northern blot analysis
  • RESULTS
  • Probing for a potential phosphohistidine phosphatase in porcine liver cytosol
  • Purification of phosphohistidine phosphatase from porcine liver
  • Amino acid sequencing
  • Cloning and expression of a human 14-kDa phosphohistidine phosphatase
  • Messenger RNA expression
  • Sequence comparisons
  • DISCUSSION