Role of the C-terminal extension in a bacterial tyrosinase

Role of the C-terminal extension in a bacterial tyrosinase

Tác giả: Michael Fairhead and Linda Thöny-Meyer

Lĩnh vực: EMPA, Swiss Federal Laboratories for Materials Testing and Research, Laboratory for Biomaterials, St Gallen, Switzerland

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này báo cáo về tyrosinase từ vi khuẩn Verrucomicrobium spinosum, một loại enzyme khác biệt với các enzyme tyrosinase từ Streptomyces sp. do sự hiện diện của phần mở rộng C-terminal. Các nhà nghiên cứu đã biểu hiện và tinh chế các dạng biến thể khác nhau của enzyme này trong vi khuẩn E. coli, phát hiện ra rằng việc loại bỏ phần mở rộng C-terminal đã làm tăng đáng kể hoạt động của enzyme. Nghiên cứu cũng nhấn mạnh vai trò của một axit amin phenylalanine trong miền C-terminal. Kết quả cho thấy tyrosinase V. spinosum là một ví dụ mới trong họ enzyme này, có khả năng được sản xuất và tinh chế hiệu quả, góp phần nâng cao hiểu biết về các enzyme này cũng như ứng dụng công nghệ sinh học của chúng.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Introduction
• Abbreviations
• Recombinant V. spinosum tyrosinase
• Results and Discussion
• Analysis of the V. spinosum tyrosinase gene region
• Features of the amino acid sequence of the V. spinosum tyrosinase
• Recombinant expression of V. spinosum tyrosinase in E. coli
• Reconstitution of recombinant V. spinosum tyrosinase with copper
• C-terminal processing by trypsin
• Recombinant core tyrosinase
• Mono- and diphenolase activities of the recombinant tyrosinases
• Role of Phe453 in the pro-tyrosinase C-terminal
• Nonfunctional tyrosinase mutants
• Verrucomicrobium spinosum tyrosinase as an alternative model bacterial enzyme
• Experimental procedures
• Materials
• Molecular biology and molecular cloning
• Protein expression
• Protein purification
• Size determination
• Enzyme assay
• Bioinformatics
• Copper reconstitution
• Copper analysis
• Trypsinization
• Chemical denaturation of proteins
• Acknowledgements
• References
• Supporting information