Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 44 trang
Dung lượng: 502 KB

Giới thiệu nội dung

Tổng hợp và tạo dòng phân tử gen Interferon Alpha 2A

Tác giả: Hoàng Đức Chiến

Lĩnh vực: Công nghệ sinh học

Nội dung tài liệu:

Đề tài này tập trung vào việc tổng hợp và tạo dòng phân tử gen Interferon Alpha 2A. Nghiên cứu được thực hiện nhằm cung cấp vật liệu di truyền cho các nghiên cứu và ứng dụng khác trong lĩnh vực sinh học phân tử. Phương pháp chính được áp dụng là kỹ thuật PCR để tổng hợp gen và sau đó tạo dòng gen này bằng cách gắn vào vector pGEM-T và chuyển vào vi khuẩn E. coli. Đề tài cũng trình bày các kết quả đạt được, bao gồm việc tổng hợp thành công gen Interferon Alpha 2A, biến nạp gen vào vi khuẩn E. coli, kiểm tra đoạn gen chèn bằng kỹ thuật PCR, enzyme cắt và điện di, cũng như giải trình tự để xác định đúng trình tự đoạn gen. Nghiên cứu này có ý nghĩa quan trọng trong bối cảnh interferon được sử dụng rộng rãi trong điều trị các bệnh nguy hiểm như ung thư và các bệnh do virus, trong khi việc sản xuất trong nước còn hạn chế và giá thành cao.

Mục lục chi tiết:

  • Lời cảm ơn
  • Tóm tắt khóa luận
  • Mục lục
  • Danh sách các chữ viết tắt
  • Danh sách các hình
  • PHẦN I. GIỚI THIỆU
    • 1.1. Đặt vấn đề
    • 1.2. Mục đích – yêu cầu
      • 1.2.1. Mục đích
      • 1.2.2. Yêu cầu
  • PHẦN II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
    • 2.1. Sơ lược về interferon
      • 2.1.1. Đặc điểm chung của interferon
      • 2.1.2. Đặc điểm interferon alpha 2a
      • 2.1.3. Tình hình nghiên cứu
    • 2.2. Kỹ thuật PCR (polymerase chain reaction)
      • 2.2.1. Giới thiệu về phản ứng PCR
      • 2.2.2. Một số yếu tố tham gia vào phản ứng PCR
        • 2.2.2.1. Enzyme DNA polymerase
        • 2.2.2.2. Các nucleotide tự do (dNTPs)
        • 2.2.2.3. Primer và nhiệt độ lai
        • 2.2.2.4. DNA khuôn
        • 2.2.2.5. Dung dịch đệm
        • 2.2.2.6. Số chu kỳ phản ứng
        • 2.2.2.7. Nhiệt độ và pH
      • 2.2.3. Tổng hợp gen
      • 2.2.4. Ứng dụng của PCR
    • 2.3. Kỹ thuật điện di DNA
    • 2.4. Hiện tượng biến nạp ở vi khuẩn
      • 2.4.1. Hiện tượng biến nạp
      • 2.4.2. Vector – công cụ biến nạp
        • 2.4.2.1. Plasmid
        • 2.4.2.2 Phage
      • 2.4.3. Biến nạp nhân tạo ở E. coli
        • 2.4.3.1. Chuẩn bị tế bào khả nạp
        • 2.4.3.2. Chọn lọc tế bào vi khuẩn đã được biến nạp
      • 2.4.4. Vai trò ứng dụng
    • 2.5. Tách chiết DNA plasmid
    • 2.6. Một số enzyme sử dụng trong biến nạp
      • 2.6.1. Enzyme cắt giới hạn
      • 2.6.2. Enzyme nối
    • 2.7. Nguyên tắc đọc trình tự
      • 2.7.1. Phương pháp đọc trình tự của Sanger
      • 2.7.2. Giải mã trình tự bằng hệ thống tự động
  • PHẦN III. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
    • 3.1. Thời gian và địa điểm thực hiện đề tài
    • 3.2. Vật liệu
      • 3.2.1. Vật liệu làm thí nghiệm
        • 3.2.1.1. Sáu đoạn oligonucleotide và hai primer
        • 3.2.1.2. Vi khuẩn E. coli Top10 F’
        • 3.2.1.3. Plasmid pGEM-T
      • 3.2.2. Dụng cụ thí nghiệm
      • 3.2.3. Thiết bị máy móc
      • 3.2.4. Hóa chất sử dụng
    • 3.3. Phương pháp nghiên cứu
      • 3.3.1. Tổng hợp gen IFN-a2a bằng PCR và chạy điện di kiểm tra
        • 3.3.1.1. Tổng hợp đoạn gen
        • 3.3.1.2. Chạy điện di kiểm tra
      • 3.3.2. Tinh sạch DNA từ gel và thực hiện phản ứng A-Tailing cho đoạn DNA
      • 3.3.3. Thực hiện phản ứng nối DNA đã được A-Tailing vào plasmid pGEM-T
      • 3.3.4. Chuẩn bị tế bào khả nạp và thực hiện phản ứng biến nạp
      • 3.3.5. Chọn lọc khuẩn lạc mong muốn
      • 3.3.6. Quy trình tách plasmid
      • 3.3.7. Chạy PCR kiểm tra
      • 3.3.8. Thực hiện phản ứng cắt plasmid bằng enzyme cắt giới hạn
  • PHẦN IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
    • 4.1. Phản ứng tổng hợp IFN-a2a
    • 4.2. Tạo dòng phân tử IFN-a2a
      • 4.2.1. Kết quả biến nạp
      • 4.2.2. Tách plasmid
    • 4.3. Kết quả kiểm tra
      • 4.3.1. Kiểm tra PCR
      • 4.3.2. Cắt bằng enzyme cắt giới hạn
    • 4.4. Kết quả giải trình tự
  • Phần V. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
    • 5.1. Kết luận
    • 5.2. Đề nghị
  • TÀI LIỆU THAM KHẢO
  • PHỤ LỤC