Báo cáo Y học: Leucine aminopeptidase during meiotic development

Tác giả: Takashi Ishizaki, Aki Tosaka, Takayuki Nara, Narumichi Aoshima, Satoshi Namekawa, Kei Watanabe, Fumika Hamada, Akira Omori, Kengo Sakaguchi

Lĩnh vực: Sinh học Ứng dụng, Khoa học & Công nghệ

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định và mô tả chức năng của một loại enzyme leucine aminopeptidase (LAP) trong quá trình phát triển giảm phân của nấm mốc basidiomycete Coprinus cinereus. Enzyme này, được đặt tên là CoLAP, được phát hiện có hàm lượng cao trong mô giảm phân của C. cinereus. Các nhà nghiên cứu đã tiến hành tinh sạch trực tiếp enzyme, nhân gene bằng phương pháp PCR, và xác định trình tự gene của nó. Kết quả cho thấy CoLAP có cấu trúc tương đồng với leucine aminopeptidase ở sinh vật nhân thực và có khối lượng phân tử 52.4 kDa, tạo thành một hexamer. Phân tích biểu hiện gene và phân bố không gian cho thấy CoLAP dồi dào trong các tế bào giảm phân và các tế bào hỗ trợ xung quanh chúng, đặc biệt là trong giai đoạn prophase giảm phân. Nghiên cứu cũng gợi ý rằng CoLAP có vai trò trong việc sửa chữa DNA trong các tế bào sinh dưỡng (mycelium).

Mục lục chi tiết:

• Leucine aminopeptidase during meiotic development
• Abstract
• Keywords
• Introduction
• Materials and Methods
• Culture of C. cinereus and collection of the fruiting bodies
• Aminopeptidase activity assays
• Purification of aminopeptidase from tissues at meiotic prophase
• Over-expression and purification of a CoLAP protein
• Immunological analysis and immunofluorescence microscopy
• Results
• Purification and characterization of an aminopeptidase in basidia of C. cinereus at meiotic prophase
• Isolation and characterization of cDNA of the meiotic aminopeptidase in Coprinus meiocytes
• Nucleotide and deduced amino-acid sequences of CoLAP and its flanking regions
• Northern hybridization of CoLAP
• Immunohistochemical localization of CoLAP during meiosis
• Discussion