Báo cáo khoa học: Spermosin, a trypsin-like protease from ascidian sperm cDNA cloning, protein structures and functional analysis

Spermosin, a trypsin-like protease from ascidian sperm cDNA cloning, protein structures and functional analysis

Tác giả: Eri Kodama, Tadashi Baba, Nobuhisa Kohno, Sayaka Satoh, Hideyoshi Yokosawa and Hitoshi Sawada

Lĩnh vực: Biochemistry, Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Hokkaido University; Institute of Applied Biochemistry, University of Tsukuba

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày việc phân lập và phân tích trình tự amino acid của preprospermosin, một enzyme trypsin-like từ tinh trùng của ascidian (Urochordata) Halocynthia roretzi. Preprospermosin được xác định có 388 amino acid và được phân loại là một thành viên mới của họ trypsin. mRNA của preprospermosin biểu hiện đặc hiệu trong tuyến sinh dục của ascidian. Spermosin tinh khiết bao gồm hai dạng là 33 kDa và 40 kDa, với các chuỗi nhẹ khác nhau về độ dài. Vùng giàu proline trong chuỗi nhẹ L1 được chứng minh là có khả năng liên kết với màng ngoài trứng (vitelline coat) của ascidian, cho thấy vai trò của spermosin trong việc bám dính của tinh trùng và quá trình thụ tinh.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Biologicals
• Purification and assay procedure of spermosin
• Determination of N-terminal amino-acid sequences
• Cloning of spermosin cDNA
• Northern blot analysis
• Extraction of the vitelline coat
• Expression of GST-spermosin light chain fusion proteins
• Binding of GST-spermosin light chain fusion proteins to the vitelline coat
• Results
• CDNA cloning of ascidian spermosin
• Expression of spermosin mRNA in ascidian gonads
• The presence of two forms of spermosin in ascidian sperm
• Binding of spermosin light chains to the vitelline coat
• Discussion
• Acknowledgements
• References