Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 8 trang
Dung lượng: 175 KB

Giới thiệu nội dung

Molecular Cloning and Functional Expression of a Gene Encoding an Antiarrhythmia Peptide Derived from the Scorpion Toxin

Tác giả: Fang Peng, Xian-Chun Zeng, Xiao-Hua He, Jun Pu, Wen-Xin Li, Zhi-Hui Zhu, and Hui Liu

Lĩnh vực: Biotechnology, Cardiology

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này báo cáo việc phân lập, nhân bản và biểu hiện chức năng của gen BmKIM từ bọ cạp Buthus martensi Karsch. BmKIM, một peptide độc có trình tự tương đồng cao với các độc tố ức chế côn trùng, đã được biểu hiện tái tổ hợp trong E. coli. Kết quả thử nghiệm cho thấy BmKIM có độc tính đối với cả động vật có vú và côn trùng. Đặc biệt, BmKIM đã ức chế dòng natri trong tế bào thần kinh hạch lưng rễ chuột và tế bào cơ tim thất, đồng thời bảo vệ chống lại chứng loạn nhịp tim do aconitine gây ra. Nghiên cứu này lần đầu tiên cho thấy một độc tố có ái lực cao với côn trùng lại có độc tính đối với động vật có vú và có tiềm năng trong điều trị các vấn đề tim mạch.

Mục lục chi tiết:

  • Synthesis of oligonucleotide probe
  • Screening of the venom gland cDNA library
  • Amplification of genomic DNA of BmKIM
  • DNA sequence analysis
  • Construction of expression vector pGEX-5x-1-BmKIM
  • Cleavage of fusion protein and purification by affinity chromatography
  • Amino acid composition analysis and N-terminal sequencing
  • Circular dichroism spectroscopy
  • Toxicity tests
  • Preparation of adult rabbit ventricular myocyte
  • Preparation of albino rats dorsal root ganglia neurons
  • Whole-cell patch-clamp recording
  • Aconitine-induced arrhythmia model
  • Isolation and sequencing of BmKIM cDNA
  • Construction of expression vectors and expression of the fusion proteins
  • Enzymatic cleavage of fusion protein and purification of the recombinant BmKIM
  • Circular dichroism spectrum
  • Effect of rBmKIM on sodium currents in DRG neurons and ventricular myocytes
  • Pharmacological activity of recombinant BmKIM
  • Assay of antiarrhythmia activity
  • Discussion