Báo cáo Y học: Development of a selective photoactivatable antagonist for corticotropin-releasing factor receptor, type 2 (CRF2)

Development of a selective photoactivatable antagonist for corticotropin-releasing factor receptor, type 2 (CRF2)

Tác giả: Ines Bonk and Andreas Rühmann

Lĩnh vực: Biochemistry, Pharmacology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày việc tổng hợp và đặc tính hóa một chất tương tự photoactivatable chọn lọc của antisauvagine-30 (aSvg-30), một chất đối kháng đặc hiệu với thụ thể corticotropin-releasing factor loại 2 (CRF2). Chất tương tự mới, có tên là ATB-[His12]Svg(12–40), đã cho thấy ái lực liên kết cao với CRF2β nhưng không liên kết với thụ thể CRF1. Nghiên cứu cũng chứng minh rằng ATB-[His12]Svg(12–40) có khả năng ức chế sự sản sinh cAMP do Svg kích thích trong các tế bào biểu hiện CRF2β. Ngoài ra, một protein có khối lượng phân tử 66 kDa đã được xác định thông qua liên kết cộng hóa trị giữa ATB-[His12]Svg(12–40) được đánh dấu phóng xạ với thụ thể mCRF2β. Độ đặc hiệu của chất đối kháng CRF2β photoactivatable này đã được chứng minh bằng SDS/PAGE, trong đó nó có thể bị thay thế bởi antisauvagine-30 nhưng không phải bởi các peptide không liên quan khác.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Synthesis of 4-(1-Azi-2,2,2-trifluoroethyl)benzoic acid
• Synthesis and purification of peptides
• Photoactivatable CRF2 receptor antagonist
• Photolysis of ATB-[His12]Svg(12–40), and its radioactively labeled analog 1251-labeled ATB-[His12]Svg(12–40)
• Crude membrane preparation
• Binding assays with CRF peptides
• CAMP stimulation
• Photoaffinity labeling experiments with 125I-labeled ATB-[His12]Svg(12–40)
• Results
• Synthesis of ATB-[His12]Svg(12–40) and its radioactively labeled analog
• Binding and cAMP assay
• Photoaffinity labeling experiments
• Discussion
• References