Báo cáo khoa học: Purification and cDNA cloning of a cellulase from abalone Haliotis discus hannai

Purification and cDNA Cloning of a Cellulase from Abalone Haliotis discus hannai

Tác giả: Ken-ichi Suzuki, Takao Ojima and Kiyoyoshi Nishita

Lĩnh vực: Biochemistry and Biotechnology, Graduate School of Fisheries Sciences, Hokkaido University, Japan

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập và làm rõ cấu trúc gen của enzyme cellulase từ abalone Haliotis discus hannai. Enzyme được đặt tên là HdEG66, với khối lượng phân tử ước tính là 66.000 Da. Quá trình phân lập bao gồm nhiều bước sắc ký khác nhau, cho thấy hoạt tính thủy phân đối với carboxymethylcellulose ở nhiệt độ và pH tối ưu lần lượt là 38°C và 6.3. Các nhà nghiên cứu đã khuếch đại thành công các đoạn cDNA mã hóa cho HdEG66 bằng kỹ thuật PCR, từ đó xác định được trình tự nucleotide hoàn chỉnh dài 1898 bp. Phân tích trình tự cho thấy enzyme có vùng xúc tác tương đồng với các cellulase GHF9 từ động vật chân đốt và các vi khuẩn khác, đồng thời sở hữu một mô-đun liên kết carbohydrate (CBM) loại II ở vùng N-terminal. Quan trọng hơn, việc phân tích gen bộ gen đã chỉ ra rằng HdEG66 là sản phẩm của chính abalone, chứ không phải từ vi khuẩn cộng sinh.

Mục lục chi tiết:

• Materials and methods
• Determination of enzymatic activity
• Amino-acid sequencing
• SDS/PAGE
• Zymography
• Determination of protein concentration
• cDNA cloning
• Results
• Purification of cellulase from abalone hepatopancreas
• Partial amino-acid sequence of HdEG66
• PCR amplification of HdEG66-cDNA
• Amplification of HdEG66 gene from abalone chromosomal DNA
• Discussion
• References