Báo cáo khoa học: Amino acid residues on the surface of soybean 4-kDa peptide involved in the interaction with its binding protein

Amino Acid Residues on the Surface of Soybean 4-kDa Peptide Involved in the Interaction with Its Binding Protein

Tác giả: Kazuki Hanada, Yuji Nishiuchi, Hisashi Hirano

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung làm sáng tỏ cơ chế tương tác giữa peptide 4-kDa từ đậu nành và protein liên kết 43-kDa, một protein được cho là có chức năng giống thụ thể và đóng vai trò trong quá trình truyền tín hiệu tế bào. Bằng các phương pháp như sắc ký lọc gel, miễn dịch blot điểm và cộng hưởng plasmon bề mặt (SPR), các nhà khoa học đã xác định rằng peptide 4-kDa liên kết với dạng dimer của protein 43-kDa. Phân tích đột biến alanine đã được sử dụng để xác định các gốc amino acid trên bề mặt peptide 4-kDa đóng vai trò quan trọng trong tương tác này. Kết quả cho thấy vùng kỵ nước ở đầu C của peptide 4-kDa đóng vai trò thiết yếu trong việc liên kết với protein 43-kDa, với một số gốc amino acid kỵ nước và thơm được xác định là có đóng góp đáng kể.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Gel-filtration chromatography
• Dot-blot analysis
• Construction of the bacterial expression vector and site-directed mutagenesis
• Expression and purification of the 4-kDa peptide variants
• Peptide mass fingerprinting
• Biacore
• Results and discussion
• Identification of a complex of 4-kDa peptide and 43-kDa protein
• Interaction of Trx-tagged 4-kDa peptide with the 43-kDa protein
• Dissociation constants of the 4-kDa peptide variants
• Structure of the functional epitopes of the 4-kDa peptide
• Role of amino acids in the 4-kDa peptide
• Interaction of insulin with the 43-kDa protein
• Acknowledgements
• References