Báo cáo khoa học: A truncated form of DNA topoisomerase IIb associates with the mtDNA genome in mammalian mitochondria

A Truncated Form Of DNA Topoisomerase IIβ Associates With The Mtdna Genome In Mammalian Mitochondria

Tác giả: Robert L. Low, Shayla Orton, David B. Friedman

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Di truyền học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này báo cáo việc phát hiện một hoạt động DNA topoisomerase II kiểu II trong ty thể bò. Hoạt động này được xác định trong các phức hợp mtDNA và protein sao chép, có khả năng làm giãn khuôn DNA siêu xoắn âm, yêu cầu Mg²⁺ và ATP, và bị ức chế bởi etoposide. Phân tích khối phổ cho thấy hoạt động ty thể này là một dạng rút gọn của DNA topoisomerase IIβ, một trong hai hoạt động DNA topoisomerase II đã biết trong nhân tế bào động vật có vú. Nghiên cứu cũng thảo luận về vai trò tiềm năng của enzyme này trong quá trình sao chép mtDNA và sự liên quan của nó với mtDNA.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Antibodies
• Isolation of the complex of mitochondrial DNA and its associated proteins
• Relaxation and catenation assays for DNA topoisomerase II activity
• Purification of the mitochondrial DNA topoisomerase II
• Western blot analysis
• Protein identification by mass spectrometry
• Results
• Recovery of a DNA topoisomerases II activity from isolated complexes of mtDNA and protein
• The DNA topoisomerases II activity copurifies with mitochondria
• The purified mitochondrial DNA topoisomerase II activity can be assigned to a polypeptide of ≈ 150 kDa
• Identification of the mitochondrial type II activity as a truncated form of DNA topoisomerases IIẞ
• Further evidence that the truncated topo IIẞ is mitochondrial in origin and not a nuclear contaminant
• Discussion
• References