Báo cáo khóa học: Vertical-scanning mutagenesis of amino acids in a model N-myristoylation motif reveals the major amino-terminal sequence requirements for protein N-myristoylation

Vertical-scanning mutagenesis of amino acids in a model N-myristoylation motif reveals the major amino-terminal sequence requirements for protein N-myristoylation

Tác giả: Toshihiko Utsumi, Kengo Nakano, Takeshi Funakoshi, Yoshiyuki Kayano, Sayaka Nakao, Nagisa Sakurai, Hiroyuki Iwata, Rumi Ishisaka

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định các yêu cầu về trình tự các axit amin ở đầu N của protein đối với quá trình N-myristoylation. Sử dụng phương pháp đột biến theo chiều dọc (vertical-scanning mutagenesis) trên các mutant của yếu tố hoại tử khối u (TNF) làm mô hình protein nền, các nhà nghiên cứu đã khám phá ra rằng sự kết hợp của các axit amin ở vị trí 3 và 6 đóng vai trò là yếu tố quyết định chính đối với khả năng N-myristoylation. Đặc biệt, sự hiện diện của Ser ở vị trí 6 cho phép một loạt các axit amin ở vị trí 3, trong khi sự vắng mặt của Ser ở vị trí này lại giới hạn đáng kể các lựa chọn axit amin cho vị trí đó. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng sự có mặt của Lys ở vị trí 7 có thể ảnh hưởng đến yêu cầu về axit amin ở vị trí 3, cho phép Lys được chấp nhận tại vị trí này.

Mục lục chi tiết:

• Experimental procedures
• Materials
• Plasmid construction
• In vitro transcription and translation
• Transfection of COS-1 cells and determination of N-myristoylated proteins
• Western blotting
• Immunoprecipitation
• SDS/PAGE and fluorography
• Results
• Effect of the amino acid residue at position 6 in the N-myristoylation consensus motif on the efficiency of the cotranslational N-myristoylation reaction
• Effect of the amino acid residue at position 6 in the N-myristoylation consensus motif on the amino acid requirement at position 3 for cotranslational protein N-myristoylation
• The presence of a Lys residue at position 7 in the N-myristoylation consensus motif affects the amino acid requirement at position 3 and Lys becomes permitted at this position
• Discussion
• Acknowledgements
• References