Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 10 trang
Dung lượng: 303 KB

Giới thiệu nội dung

The zinc-binding site of a class I aminoacyl-tRNA synthetase is a SWIM domain that modulates amino acid binding via the tRNA acceptor arm

Tác giả: Rajat Banerjee, Daniel Y. Dubois, Joelle Gauthier, Sheng-Xiang Lin, Siddhartha Roy, and Jacques Lapointe

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử, Di truyền học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của miền SWIM (SWIM domain) trong enzym glutamyl-tRNA synthetase (GluRS) của vi khuẩn E. coli. Miền SWIM này chứa một nguyên tử kẽm, có khả năng tương tác với cả DNA và protein. Khi có mặt tRNAGlu, biến thể C100Y của GluRS cho thấy ái lực thấp hơn đối với L-glutamate, với các giá trị Km và Ką tăng lên đáng kể. Tuy nhiên, khi không có tRNAGlu, ái lực của glutamate đối với biến thể C100Y và enzyme dạng hoang dã là như nhau. Kết quả này cho thấy miền SWIM của GluRS điều chỉnh sự gắn kết glutamate tại vị trí hoạt động thông qua tương tác với nhánh chấp nhận của tRNA. Phân tích phát sinh loài chỉ ra rằng các GluRS cổ đại có miền SWIM gắn kẽm mạnh mẽ, cho thấy miền này đã tiến hóa để định vị chính xác nhánh chấp nhận của tRNA trong vị trí hoạt động, từ đó góp phần tạo thành vị trí gắn kết glutamate.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Thủ tục thực nghiệm
  • Tăng cường và tinh sạch GluRS C100Y
  • Aminoacyl hóa tRNAGlu và đo động học
  • Đo hoạt độ GluRS sau điện di
  • Phương pháp huỳnh quang
  • Phân tích lưỡng sắc vòng tròn
  • Đo Ka cho L-glutamate bằng cộng hưởng từ hạt nhân
  • Căn chỉnh trình tự và phân tích phát sinh loài
  • Kết quả và thảo luận
  • Vai trò của tRNAGlu và tRNAGln trong việc hình thành các vị trí gắn kết chất nền amino acid của E. coli GluRS và GlnRS, tương ứng
  • Thảo luận
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo