Báo cáo khóa học: A multi-protein complex containing cold shock domain (Y-box) and polypyrimidine tract binding proteins forms on the vascular endothelial growth factor mRNA Potential role in mRNA stabilization

A Multi-protein Complex Containing Cold Shock Domain (Y-box) and Polypyrimidine Tract Binding Proteins Forms on the Vascular Endothelial Growth Factor mRNA

Tác giả: Leeanne S. Coles, M. Antonetta Bartley, Andrew Bert, Julie Hunter, Steven Polyak, Peter Diamond, Mathew A. Vadas, Gregory J. Goodall

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Di truyền học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của phức hợp đa protein, bao gồm các protein có miền sốc lạnh (CSD) và protein liên kết với đoạn polypyrimidine (PTB), trong việc điều hòa ổn định mRNA của yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu (VEGF). Các phát hiện cho thấy các phức hợp này hình thành trên mRNA VEGF, đặc biệt là trên các vùng 5′- và 3′-UTR, và có thể đóng vai trò quan trọng trong việc ổn định mRNA, cả trong điều kiện không kích thích và kích thích. Nghiên cứu cũng đề xuất một vai trò kết hợp ở cấp độ phiên mã và sau phiên mã của các protein CSD trong việc điều hòa gen VEGF và các gen yếu tố tăng trưởng khác.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Plasmid constructs
• Oligonucleotides
• RNA probe preparation
• Preparation of recombinant and cytoplasmic proteins
• FPLC gel filtration of cytoplasmic extracts
• Antibodies
• RNA gel shift analysis, competitions and antibody analysis
• UV cross-linking
• RNA immunoprecipitation assay
• Cell culture, stable transfection and cell stimulation
• Analysis of mRNA stability in vivo
• Results
• The VEGF 5′-UTR binds cytoplasmic and recombinant CSD proteins
• The VEGF 5′-UTR CSD-containing cytoplasmic complexes also contain PTB
• VEGF 5′-UTR CCV1 complex formation requires the consensus 5′-ACCUCUU-3′ sequence and a downstream 5′-UUUUCUU-3′ sequence
• The VEGF 3′-UTR CSD site 3 binds CSD and PTB proteins
• The VEGF mRNA CSD/PTB binding sites play a role in VEGF mRNA stability
• Discussion
• Model for combined transcriptional and post-transcriptional regulation of VEGF expression
• Acknowledgements
• References