Báo cáo khoa học: Characterization of a cathepsin L-associated protein in Artemia and its relationship to the FAS-I family of cell adhesion proteins

Characterization of a Cathepsin L-Associated Protein in Artemia and its Relationship to the FAS-I Family of Cell Adhesion Proteins

Tên đề tài: Characterization of a Cathepsin L-Associated Protein in Artemia and its Relationship to the FAS-I Family of Cell Adhesion Proteins

Tác giả: Alden H. Warner, Ervin Pullumbi, Reinout Amons, and Liqian Liu

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích một protein liên quan đến cathepsin L (CLAP) trong phôi và ấu trùng của tôm ngâm mặn Artemia franciscana. CLAP là một tiểu đơn vị không có hoạt tính xúc tác, tồn tại dưới dạng phức hợp heterodimeric với cathepsin L (CL). Các nhà nghiên cứu đã phân lập và xác định trình tự cDNA của CLAP, cho thấy nó có hai miền tương tự với các protein bám dính tế bào thuộc họ fasciclin I. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng CLAP giúp ổn định hoạt động của CL ở các điều kiện pH và nhiệt độ khác nhau, điều này quan trọng cho vai trò của CL trong môi trường sống của Artemia. CLAP có khả năng kháng lại sự phân giải bởi cathepsin L, cho thấy vai trò bảo vệ và ổn định hoạt động của phức hợp enzyme.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Purification of cathepsin L-like protease
• Protein and protease assays
• Isoelectric focussing and sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis
• Cysteine protease analysis at different stages in the Artemia life cycle
• Amino acid sequencing of CLAP and CLAP fragments
• Isolation and sequencing of cDNA clones encoding CLAP
• Results
• Separation of Artemia CLP subunits by HPLC on Mono S
• SDS/PAGE analysis of Artemia cathepsin L fractions from Mono S column
• Isoelectric focusing of CLAP
• Activity of dimer and monomer forms of Artemia CLP at different pH and temperatures
• Resistance of CLAP to degradation by Artemia cathepsin L monomer
• Abundance of the catalytic and noncatalytic subunits of CLP at various stages in the Artemia life cycle
• Amino acid sequence of cathepsin L-associated protein
• Higher order structure of CLAP
• Discussion