Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 169 KB

Giới thiệu nội dung

Characterization of the tRNA and ribosome-dependent pppGpp-synthesis by recombinant stringent factor from Escherichia coli

Tác giả: Rose-Marie Knutsson Jenvert, Lovisa Holmberg Schiavone

Lĩnh vực: Sinh học Tế bào

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích yếu tố gây sốc (stringent factor – SF), một enzyme có vai trò quan trọng trong phản ứng gây sốc của tế bào prokaryote. SF là một enzyme ATP:GTP pyrophosphoryl transferase phụ thuộc ribosome, được kích hoạt bởi tRNA không được acyl hóa tại vị trí aminoacyl (A-site) của ribosome khi tế bào thiếu hụt dinh dưỡng. Bài báo mô tả quá trình phân lập và đặc tính hóa SF tái tổ hợp từ Escherichia coli, cũng như khảo sát sự phụ thuộc của phản ứng tổng hợp pppGpp vào ribosome, tRNA, và template. Kết quả cho thấy SF tương tác với ribosome và tRNA không được acyl hóa, và sự hiện diện của cả hai là cần thiết cho hoạt động xúc tác tối ưu. Nghiên cứu cũng khám phá các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả của phản ứng, bao gồm thứ tự thêm các thành phần và nồng độ của chúng.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Keywords
  • Correspondence
  • Abstract
  • Abbreviations
  • Results and Discussion
  • Purification of recombinant SF
  • Activity of the recombinant protein in the complete system
  • Endogenous activity of SF
  • Ribosome-dependence of SF in the complete system
  • Ribosome-dependent but tRNA-independent pppGpp synthesis?
  • Template-dependence of pppGpp-synthesis
  • Binding states of tRNAs
  • tRNA-dependence of pppGpp synthesis
  • Binding of tRNA Met to ribosomes
  • Titration of tRNA Phe to the A-site of T4-mRNA programmed ribosomes
  • Binding of tRNA Phe to the A, P and E-sites of poly(U) programmed ribosomes
  • The stimulatory effect of tRNA was not affected by two different ribosome/SF ratios tested
  • Does SF form a complex with unacylated tRNA in solution?
  • Experimental procedures
  • Materials
  • Cloning of the E. coli relA gene
  • Expression and purification of stringent factor
  • Purification of ribosomes
  • pppGpp synthesis
  • Separation of pppGpp from GTP and calculation of synthesis speeds
  • Chemical modification and primer extension analysis
  • Filter-binding assays
  • Acknowledgements
  • References