Báo cáo khoa học: Molecular analysis of the interaction between cardosin A and phospholipase Da Identification of RGD/KGE sequences as binding motifs for C2 domains

Molecular Analysis Of The Interaction Between Cardosin A And Phospholipase Dα

Tác giả: Isaura Simões, Eva-Christina Mueller, Albrecht Otto, Daniel Bur, Alice Y. Cheung, Carlos Faro, and Euclides Pires

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích phân tử mối tương tác giữa cardosin A, một loại aspartic proteinase thực vật, và phospholipase Dα (PLDα). Các kết quả chỉ ra rằng miền C2 của PLDα có khả năng liên kết với cardosin A. Phân tích sâu hơn đã xác định các trình tự RGD và KGE trong cardosin A là các yếu tố quan trọng cho sự tương tác này. Nghiên cứu cũng khám phá vai trò của các yếu tố này trong việc nhận diện và khả năng cardosin A có thể phân giải miền C2 của PLDα khi phức hợp bị phá vỡ. Các phát hiện này mở ra hướng hiểu biết mới về vai trò của các miền C2 trong nhận diện protein và khả năng tương tác giữa các protein thực vật.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Purification and identification of cardosin A-interacting protein
• Western blotting analysis
• Molecular cloning of C. cardunculus L PLDα cDNA and characterization of the deduced amino-acid sequence
• The C2 domain is sufficient to promote binding of PLDa to cardosin A
• Interaction between cardosin A and PLDa is mediated through RGD and KGE sequences
• The C2 domain is degraded by cardosin A after complex disruption
• Discussion
• Experimental procedures
• Plant material
• Purification of cardosin A-interacting protein
• MS analysis
• Extract preparation and immunoprecipitation
• cDNA cloning of C. cardunculus L PLDa
• GST fusion proteins cDNA cloning
• Recombinant pCA and mutated pCA
• Binding assays
• Gel electrophoresis and immunoblotting
• Acknowledgements
• References