Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 14 trang
Dung lượng: 229 KB

Giới thiệu nội dung

In vitro Gamma-Secretase Cleavage of the Alzheimer’s Amyloid Precursor Protein Correlates to a Subset of Presenilin Complexes and Is Inhibited by Zinc

Tác giả: David E. Hoke, Jiang-Li Tan, Nancy T. Ilaya, Janetta G. Culvenor, Stephanie J. Smith, Anthony R. White, Colin L. Masters and Geneviève M. Evin

Lĩnh vực: Khoa học sự sống, Y học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày việc phát triển hai phương pháp thử nghiệm in vitro mới để đánh giá hoạt động của gamma-secretase, một enzyme đóng vai trò quan trọng trong quá trình sinh tổng hợp amyloid-beta (Aβ) trong bệnh Alzheimer. Các phương pháp này cho phép nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt động của enzyme, bao gồm nồng độ chất tẩy, dung môi và kim loại. Kết quả cho thấy nồng độ chất tẩy ảnh hưởng đến sự phân bố kích thước của phức hợp presenilin, và hoạt động của gamma-secretase tương quan với một tập hợp con các phức hợp presenilin có khối lượng phân tử cao. Ngoài ra, dimethyl sulfoxide có thể điều chỉnh việc phát hiện hoạt động của gamma-secretase, trong khi kẽm làm thay đổi khối lượng phân tử biểu kiến của một chất nền có nguồn gốc từ APP và ức chế quá trình phân cắt của gamma-secretase. Những phát hiện này cung cấp hiểu biết sâu sắc hơn về các phức hợp và các yếu tố sinh hóa cần thiết cho hoạt động của gamma-secretase, đồng thời gợi ý một cơ chế mà qua đó sự rối loạn điều hòa kẽm có thể góp phần vào bệnh sinh của bệnh Alzheimer.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Từ khóa
  • Thông tin liên hệ
  • Tóm tắt
  • Phần viết tắt
  • Phân tích hoạt tính gamma-secretase in vitro
  • Thiết kế chất nền và các tiêu chuẩn APP gamma-secretase in vitro mới
  • Các sản phẩm giống Aβ và giống ɛ-CTF có mặt trong dịch chiết từ E. coli biểu hiện MC99-3FLAG
  • Phát triển các xét nghiệm gamma-secretase in vitro sử dụng MC99-3FLAG đã tinh chế làm chất nền
  • Biểu hiện và xử lý protein của SPC99-3FLAG ở động vật có vú
  • Các xét nghiệm gamma-secretase in vitro với màng tế bào COS7-SPC99-3FLAG đã hòa tan
  • Khối lượng phân tử PS và hoạt tính gamma-secretase từ các tế bào COS7-SPC99-3FLAG bị thay đổi bởi sắc ký loại trừ kích thước theo cách phụ thuộc vào nồng độ CHAPSO
  • Hoạt tính gamma-secretase từ não lợn cạo bằng sắc ký loại trừ kích thước theo cách phụ thuộc vào nồng độ CHAPSO
  • Dimethylsulfoxide có thể điều chỉnh việc phát hiện hoạt tính gamma-secretase in vitro của COS7-SPC99-3FLAG
  • Xử lý bằng kẽm của chiết xuất COS7-SPC99-3FLAG CHAPSO làm cho C101-3FLAG được chiết xuất ở khối lượng phân tử cao
  • Kẽm ức chế hoạt tính gamma-secretase trong các xét nghiệm dựa trên COS7-SPC99-3FLAG và MC99-3FLAG
  • Thảo luận
  • Quy trình thực nghiệm
  • Xây dựng các vector biểu hiện cho SPC99-3FLAG, MC99-3FLAG, tiêu chuẩn γ-3FLAG và tiêu chuẩn ε-3FLAG
  • Chuẩn bị MC99-3FLAG
  • Chuẩn bị protein γ- và ε-3FLAG
  • Chuẩn bị gamma-secretase hòa tan từ não chuột biến đổi gen PS1 A246E, não lợn cạo và các tế bào COS7-SPC99-3FLAG
  • Xét nghiệm gamma-secretase MC99-3FLAG với gamma-secretase hòa tan từ dịch chiết não chuột, dịch chiết màng lợn cạo và các phân đoạn cột
  • Các dòng tế bào và chuyển gen
  • Xác định khối lượng phân tử của các phản ứng miễn dịch FLAG từ các tế bào COS7-SPC99-3FLAG
  • Các xét nghiệm gamma-secretase in vitro với các tế bào COS7-SPC99-3FLAG
  • Sắc ký loại trừ kích thước
  • Định lượng hoạt tính gamma-secretase và ức chế bởi kẽm
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo