Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 208 KB

Giới thiệu nội dung

7,8-Diaminopelargonic Acid Aminotransferase from Mycobacterium Tuberculosis, a Potential Therapeutic Target

Tác giả: Stéphane Mann and Olivier Ploux

Lĩnh vực: Hóa sinh, Dược lý học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập, tinh sạch và đặc tính hóa enzyme 7,8-diaminopelargonic acid aminotransferase (DAPA AT) từ vi khuẩn Mycobacterium tuberculosis. DAPA AT đóng vai trò quan trọng trong quá trình sinh tổng hợp biotin, một yếu tố cần thiết cho nhiều enzyme carboxylase. Do tầm quan trọng của nó trong con đường trao đổi chất của vi khuẩn và sự khác biệt so với các sinh vật khác, DAPA AT được xem là một mục tiêu tiềm năng cho các loại thuốc kháng sinh mới. Nghiên cứu này đã chứng minh rằng enzyme này có thể bị ức chế bởi các hợp chất như amiclenomycin và một dẫn xuất mới (hợp chất 1), những chất này hoạt động như các cơ chất tự sát, dẫn đến bất hoạt enzyme một cách không thể đảo ngược. Đặc biệt, hợp chất 1 cho thấy tác dụng ức chế sự phát triển của E. coli trong điều kiện thiếu biotin, gợi ý về tiềm năng ứng dụng trong điều trị.

Mục lục chi tiết:

  • Keywords
  • Correspondence
  • Abstract
  • Introduction
  • Results and Discussion
  • Cloning, expression and purification of M. tuberculosis DAPA AT
  • Biochemical characterization
  • Determination of the kinetic parameters of the His6-tagged DAPA AT
  • Inactivation and titration of His6-tagged DAPA AT by amiclenomycin and 4-(4c-aminocyclohexa-2,5-dien-1r-yl)propanol (compound 1)
  • In vivo antibiotic effect of compound 1
  • Experimental procedures
  • Materials and equipment
  • Synthesis of compound 1
  • Cloning of M. tuberculosis bioA gene
  • Transformation and phenotype determination
  • Expression and purification of wild-type and His6-tagged recombinant M. tuberculosis DAPA AT
  • Wild-type DAPA AT
  • His-tagged DAPA AT
  • Determination of the oligomerization state
  • Protein assay
  • DAPA AT assays
  • Coupled assay
  • Direct assay
  • pH profile
  • Amino donor
  • Determination of the kinetic parameters of DAPA AT
  • Kinetics of DAPA-AT inactivation by amiclenomycin and compound 1
  • Irreversibility of the inactivation by amiclenomycin
  • Titration of DAPA AT by amiclenomycin
  • Effect of compound 1 on E. coli C268/pUC18-MTHis bioA and M. smegmatis growth
  • Acknowledgements
  • References
  • Supplementary material